Detection of different Brazilian strains of the bovine herpesvirus-1 (BHV-1) by polymerase chain reaction

• Autor(a) principal: Cândido, Alexandre Luna
• Data de Publicação: 1999
• Outros Autores: Martins, Almir de Sousa, Barros, Patrícia Pimental de, Resende, Maurício
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFS
• Texto Completo: https://ri.ufs.br/handle/riufs/866
• topic: Herpesvirus bovino; Reação em cadeia da polimerase; DNA

A técnica da reação em cadeia pela DNA polimerase (PCR) foi usada para a amplificação rápida de um fragmento de 456bp da região única curta (Us) do genoma do BHV-1. Iniciadores de 18pb do gene da ORF1 foram usados para a amplificação das amostras-padrão e brasileiras. Uma amplificação clássica não foi bem sucedida. A amplificação foi obtida quando se escolheu uma região com baixa concentração de GC no DNA do BHV-1 e através da desnaturação térmica (95° C para 5min) seguida de ciclos térmicos (94° C por 1min e 30seg; 52° C por 1min; 72° C por 1min e 30seg; e ainda por 35 ciclos de 94° C por 1min; 52° C por 1min; 72° C por 1min e 30seg; usando um tempo de extensão final de 72° C por 5min). A clivagem com Pst I confirmou a especificidade do fragmento da ORF 1 do BHV-1. A amplificação do fragmento em todas as amostras testadas sugere que a região é fortemente conservada no genoma do BHV-1. Este PCR poderá detectar rapidamente amostras clínicas, sendo sensível e específico para diagnosticar infecções pelo BHV-1.