Caracterização funcional da histona H2B variante em diferentes formas de vida de Trypanosoma cruzi

• Autor(a) principal: Roson, Juliana Nunes [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7149335; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59236
• topic: Epigenética; Trypanossoma Cruzi; Histona H2BV

A diferenciação do Trypanosoma cruzi é seguida por alterações na morfologia do parasita e de uma reorganização completa do núcleo e da estrutura da cromatina. Estudos indicam que a deposição de variantes de histonas altera a estrutura da cromatina, possivelmente afetando a regulação gênica. Recentemente, em nosso grupo foi verificado que a histona H2BV está enriquecida na cromatina das formas tripomastigotas de T. cruzi. Nesta dissertação, buscou-se entender o papel da histona H2BV nas formas de vida de T. cruzi. Para tal, foram gerados parasitas heminoucautes para H2BV (H2BV-HtzKO) e avaliados os parceiros de interação desta proteína. Em geral, os clones de H2BV-HtzKO apresentam maiores taxas de proliferação e diferenciação em metacíclicos em relação aos parasitas do tipo selvagem. Além disso,apresentam maior número de células na fase S do ciclo celular. Por proteômica quantitativa, foi confirmado que a expressão da H2BV está diminuída na cromatina e nos parasitas H2BV-HtzKO e, interessantemente, verificamos que as outras variantes de histonas (H2A.Z e H3V) também são menos abundantes. Além disso, a abundância de outras histonas (a saber, H4, H2A e H1) está aumentada nos parasitas H2BVHtzKO sugerindo um mecanismo compensatório na deposição de histonas na cromatina. Foram realizados ensaios de pulldown utilizando as recombinantes H2BV e H2B canônica (como controle) para identificar seus parceiros de interação específicos nas formas epimastigotas ou tripomastigotas. Muitas proteínas interessantes foram identificadas, mas destaca-se o fator bromodomain-2 (BDF2)exclusivamente encontrado em extratos de tripomastigotas. Sabe-se que o BDF2 reconhece a acetilação de histona e, de acordo com o mesmo, encontramos que a própria H2BV está acetilada no resíduo K97. O estudo de proteínas com função epigenéticas como destacadas nesta dissertação são importantes para o melhor entendimento da biologia de tripanosomas uma vez que participam de vias essenciais para o crescimento/diferenciação do parasita e assim, podem ser também, ótimos protótipos terapêuticos para tripanosomíases.