Testes moleculares in-house para detecção de bactérias e genes de resistência aos antimicrobianos direto de frascos de hemoculturas

• Autor(a) principal: Quiles, Milene Goncalves [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=4996411; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/50734
• topic: Bacteremia; Infecções de corrente sanguínea; Hemocultura; Diagnóstico molecular; Maldi-TOF MS; Reação em cadeia da polimerase; Resistência bacteriana; Bloodstream infection; Molecular diagnosis; Stewardship; Molecular panels; Polymerization chain reaction

RESUMO Infecções de corrente sanguínea (ICS) são importantes causas de morbimortalidade tanto no Brasil como no mundo. Estudos recentes evidenciam índices superiores a 500.000 episódios de ICS por ano com mais de 79.000 mortes anualmente. Métodos de biologia molecular e proteômica tornam-se cada vez mais frequentes em laboratórios clínicos. A implantação desses métodos na rotina laboratorial possibilita maior sensibilidade e rapidez nos resultados, colaborando para a conduta terapêutica dessas infecções. Com o objetivo de validar as técnicas de MALDI-TOF MS e PCR em tempo real in-house utilizadas em conjunto e sequenciais para diagnóstico rápido de infecções de corrente sanguínea desenvolvemos três estudos: Estudo 1: Trata-se de uma revisão sobre os testes moleculares e plataformas comerciais e em pesquisa disponíveis para diagnóstico de ICS, bem como uma descrição de estudos que avaliam o impacto clínico da utilização dessas novas tecnologias em laboratórios clínicos. Estudo 2: O objetivo desse estudo foi realizar a validação e aplicação do protocolo molecular para identificação de bactérias e genes de resistência em 166 hemoculturas positivas de 139 pacientes admitidos em três diferentes centros em São Paulo e a comparação desses resultados com aqueles provenientes de métodos fenotípicos de rotina. Houve concordância geral para identificação de gênero bacteriano em 95.4% e para espécies em 81.8% das amostras. Em enterobactérias, a detecção de resistência aos carbapenêmicos foi concordante em 95.5% e às cefalosporinas (perfil ESBL) em 87.5%. Entre os não-fermentadores, houve concordância em 80% na detecção de perfil de resistência aos carbapenêmicos. Já entre os Gram positivos, os métodos concordaram em 100% para detecção de resistência a vancomicina em enterococos e 77.1% para detecção de resistência a meticilina em estafilococos. Estudo 3: Este estudo teve como objetivo a determinação do tempo intra-laboratorial necessário para identificação de patógenos e genes de resistência em 113 episódios de ICS cujo resultado molecular e foram conclusivos, bem como a avaliação adequação terapêutica desses episódios após a comunicação imediata dos resultados aos médicos especialistas de três centros participantes. O tempo médio de ntecipação de resultado, em comparação à hemocultura tradicional foi de 35 horas. Houve modificação terapêutica em 25 episódios, dos quais 16 escalonamentos e 10 desclonamentos de agentes antimicrobianos. Desses, a conduta terapêutica foi adequada em 22 e inadequada em 3 cujo resultado molecular foi discordante do fenotípico. As maiores modificações ocorreram em microrganismos Gram negativos, com a indicação de agentes carbapenêmicos em seis episódios e de polimixina B em três. Conclusão: O protocolo molecular desenvolvido provou apresentar boa concordância com os testes convencionais de rotina. Além disso, o protocolo forneceu resultado rápido, antecipando consideravelmente o tempo para a adequação terapêutica dos episódios de ICS avaliados.