Perfil de expressão protéica de larvas de Hysterothylacium sp. (Nematoda) de peixe espada (Trichiurus lepturus) da costa do Rio de Janeiro, Brasil

• Autor(a) principal: Mantovani, Cynthia
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: https://locus.ufv.br//handle/123456789/29395
• topic: Proteômica; Parasitas - Peixe; Nematoda - Peixe; Hysterothylacium; Trichiurus lepturus; Bioquímica Molecular

Devido ao aumento do consumo de peixes crus ou mal cozidos, são de grande relevância os estudos para melhor conhecer e caracterizar estes parasitos. Atualmente, as parasitoses provenientes do pescado são consideradas emergentes, subestimadas e/ou negligenciadas. Nesse contexto, buscamos, com a utilização de técnicas de espectrometria de massa, identificar as proteínas mais expressadas por larvas de Hysterothylacium sp. nematoda pertencente a família Anisakidae, causador da parasitose humana denominada anisaquíase a qual apresenta-se potencialmente letal quando ocasiona manifestação alérgica. As larvas de Hysterothylacium sp. analisadas possuíam ceco curto e foram coletadas a partir de peixe espada (Trichiurus lepturus) da costa do estado do Rio de Janeiro, Brasil. Buscou-se, também, descrever as funções e agrupamentos de processos biológicos envolvendo as proteínas mais relevantes. Foram testadas diferentes metodologias de extração, separação de proteínas e espectrometria de massa. Observou-se que, para o procedimento de extração de proteínas, o uso do detergente SDS no tampão permitiu melhores resultados em relação ao tampão de extração CHAPS, este não possibilitou a visualização de bandas no gel de eletroforese monodimensional e, em relação a eletroforese bidimensional, os spots apresentaram-se com baixa intensidade, em ambos os casos a análise por espectrometria de massa foi inviável, no entanto, sendo o primeiro detergente inadequado para a eletroforese bidimensional, a análise das proteínas limitou-se à eletroforese monodimensional. Com relação à espectrometria de massa, verificou-se que as análises do LC-MS/MS apresentaram melhores resultados em relação ao MALDI-TOF/TOF. No total foram identificadas 87 proteínas de diversas famílias, dentre as quais julgamos importante citar as metabólicas, estruturais, ribossomais, sinalizadoras, reguladoras, transportadoras e, também, proteínas imunogênicas, segundo literatura, com a classe das ribossomais apresentando-se como a mais expressivas, totalizando 48% das proteínas identificadas. Com o auxílio do aplicativo ClueGo foram preditos 54x processos biológicos e seus agrupamentos. Este é o primeiro relato das bases moleculares de larvas de Hysterothylacium sp. relacionadas às vias metabólicas deste parasito utilizando-se como estratégia tecnologia de espectrometria de massa.