Otimização de método baseado em aptâmeros de DNA para detecção de resíduos de antibióticos

• Autor(a) principal: Vieira, Alexandre Haruo Miyamoto
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: https://locus.ufv.br//handle/123456789/28583
• topic: Antibióticos; Aptâmeros de nucleotídeos; Produtos alimentícios; Nanopartículas; Biologia Molecular

A utilização de antimicrobianos nas cadeias produtoras de carne e leite pode deixar resíduos na matéria prima, comprometendo a qualidade do produto final e a saúde do consumidor. Os métodos analíticos acreditados para assegurar que os limites máximos de resíduos estejam dentro do requerido pela legislação são altamente sensíveis, mas dependem de equipamentos caros e mão de obra treinada. A tecnologia de aptâmeros é uma alternativa para o desenvolvimento de métodos rápidos e sensíveis para a detecção de resíduos de antibióticos, metais e alérgenos em diferentes matrizes. Este trabalho teve por objetivos propor e otimizar um método colorimétrico e espectrofotométrico de detecção de ampicilina, tetraciclina, cloranfenicol e kanamicina em água e em matrizes alimentares por meio de aptâmeros já descritos na literatura. Nanopartículas de ouro foram sintetizadas pela redução por citrato em uma concentração de 10,33 nmol/L. Definiu-se a concentração de 50 mmol/L de NaCl para sua agregação, que foi confirmada por espectrofotometria e mudança de cor da solução de rosa para azul. Os aptâmeros AMP4, AMP17, CAM7, Ky2 e T20 foram adsorvidos à superfície das nanopartículas de ouro e determinou-se em 200 nmol/L a concentração necessária para protegê-las de agregação. A menor concentração de kanamicina testada e detectada pelos métodos colorimétrico e espectrofotométrico foi 0,125 g/mL. Para os demais antibióticos, mudança da cor rosa para o azul foi visualizada no controle consistindo de nanopartículas, aptâmero e sal, diferentemente do esperado. As matrizes alimentares soro de leite, carne e ovo foram processadas de forma simples e rápida para utilização nos ensaios. Diluições de 10 -3 a 10 -6 foram necessárias para evitar interferência da matriz no sistema, porém os testes foram inconclusivos devido à mudança de coloração nos tubos contendo nanopartículas, aptâmero e sal. Os resultados mostraram a necessidade de avaliar outros aptâmeros e melhorar o processamento das matrizes alimentares para a remoção de interferentes. Palavras-chave: Antibióticos. Aptâmeros de nucleotídeos. Produtos alimentícios. Nanopartículas. Detecção.