Identificação, isolamento e caracterização de fosfolipases A2 oriundas da secreção cutânea de Pithecopus azureus e Phyllomedusa tarsius

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Souza, Beatriz Blenda Pinheiro de
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: https://repositorio.unb.br/handle/10482/37028
Resumo: Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2019.
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spelling Identificação, isolamento e caracterização de fosfolipases A2 oriundas da secreção cutânea de Pithecopus azureus e Phyllomedusa tarsiusAnuro - secreções cutâneasFosfolipase A2Sequenciamento genômicoSequenciamento de aminoácidosTese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2019.O presente trabalho relata a caracterização estrutural e funcional de fosfolipases A2 (PLA2s) presentes na secreção cutânea dos anuros Pithecopus azureus e Phyllomedusa tarsius. Em P. azureus, uma fosfolipase N-glicosilada, denominada Pa-PLA2, foi isolada e sua estrutura primária madura completamente sequenciada. A Pa-PLA2 é composta por 128 resíduos de aminoácidos, cuja estrutura apresenta sete ligações dissulfeto e dois sítios N-glicosilados (Asn 67 e Asn 108). As formas glicosilada e deglicosilada da Pa-PLA2 foram avaliadas qualitativamente e mostraram-se funcionalmente catalíticas. O modelo molecular tridimensional da Pa-PLA2 indica que os motivos de glicanos observados estão localizados longe do sítio ativo da enzima e, portanto, é possível que exerçam pouco ou nenhum papel significativo na interação direta do sítio catalítico da Pa-PLA2 e seus substratos. Em P. tarsius, foram isoladas nove frações da secreção cutânea com atividade fosfolipásica e duas sequências aminoacídicas foram obtidas a partir do sequenciamento do cDNA desta espécie. Ambas as sequências, denominadas Pht-PLA2-01 e Pht-PLA2-02, contêm, respectivamente, 127 e 128 resíduos de aminoácidos e um sítio putativo de N-glicosilação (Asn 108). A massa molecular teórica da Pht-PLA2-01 N-glicosilada com o motivo de glicano GlcNAc2Man3 foi encontrada em uma das nove frações onde foram detectadas atividade fosfolipásica. A distribuição da Pht-PLA2-01 no tecido epitelial foi avaliada por imageamento do tecido pela técnica de MALDI-imaging, comprovando a real existência dessas moléculas no tecido de onde foram isoladas.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas (FAPE/AM).This work reports the structural and functional characterization of phospholipases A2 (PLA2) found on the cutaneous secretion of the anurans Pithecopus azureus and Phyllomedusa tarsius. On P. azureus, an N-glycosylated phospholipase, named Pa-PLA2, was isolated and had its mature primary structure completely sequenced. Pa-PLA2 is composed of 128 amino acid residues and its structure contains seven disulfide bonds and two N-glycosylated sites (Asn 67 and Asn 108). The glycosylated and deglycosylated forms of Pa-PLA2 were qualitatively evaluated and shown to be functionally catalytic. The three-dimensional molecular model of Pa-PLA2 indicates that the observed glycan motifs are located far from the enzyme’s active site and, therefore, may possibly exert little or no significant effect on the direct interaction between the PA-PLA2’s active site and its substrates. On P. tarsius, nine fractions with phospholipase activity were isolated from the cutaneous secretion and two amino acid sequences were obtained from the cDNA sequencing of this species. Both sequences, named Pht-PLA2-01 and Pht-PLA2-02, contain, respectively, 127 and 128 amino acid residues and one putative N-glycosylation site (Asn 108). The theoretical molecular mass of the N-glycosylated Pht-PLA2-01 with a GlcNAc2Man3 glycan motif was found on one of the nine fractions in which phospholipase activity was detected. The Pht-PLA2-01 distribution on the epithelial tissue was evaluated by MALDI-imaging, proving the real existence of these molecules on the tissue from where they were isolated.Bloch Júnior, CarlosSouza, Beatriz Blenda Pinheiro de2020-03-03T17:18:28Z2020-03-03T17:18:28Z2020-03-032019-07-29info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfSOUZA, Beatriz Blenda Pinheiro de. Identificação, isolamento e caracterização de fosfolipases A2 oriundas da secreção cutânea de Pithecopus azureus e Phyllomedusa tarsius. 2019. 120 f., il. Tese (Doutorado em Biologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2019.https://repositorio.unb.br/handle/10482/37028A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições:Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2023-07-08T00:05:38Zoai:repositorio.unb.br:10482/37028Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2023-07-08T00:05:38Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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