Analise de metilação no promotor dos genes IL8, TLR2 e TLR4 em celulas epiteliais da mucosa bucal e celulas do tecido gengival de individuos fumantes e não fumantes com periodontite cronica

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Oliveira, Naila Francis Paulo de
Data de Publicação: 2009
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1611046
Resumo: Orientador: Ana Paula de Souza Pardo
id UNICAMP-30_7f42bdac2616196e0d1a69be3d474708
oai_identifier_str oai::474330
network_acronym_str UNICAMP-30
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository_id_str
spelling Analise de metilação no promotor dos genes IL8, TLR2 e TLR4 em celulas epiteliais da mucosa bucal e celulas do tecido gengival de individuos fumantes e não fumantes com periodontite cronicaDNA methylation analysis of the IL8, TLR2 and TLR4 gene promoters in oral mucosa cells and gingival tissue of smokers and non-smokers subjects with chronic periodontitisInterleucinasReação em cadeia da polimeraseRNATabacoInterleukinPolymerase chain reactionRNATobaccoOrientador: Ana Paula de Souza PardoTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: A doença periodontal crônica é caracterizada pela inflamação e destruição dos tecidos periodontais, podendo levar à perda dos dentes. Está claro que a periodontite é influenciada pela genética do hospedeiro, constituição do biofilme bucal e o hábito de fumar. Sabe-se que a interleucina 8 (IL-8) é a principal molécula atrativa de neutrófilos. Essas células são as primeiras a chegar aos locais inflamados e além de realizar fagocitose, participam também da destruição do tecido periodontal. Sabe-se também que os patógenos que causam a periodontite são reconhecidos por proteínas receptoras de membrana denominadas receptores Toll-like (TLR), que uma vez acionados iniciam a resposta imune inata. IL8 e TLRs são expressos constitutivamente por células bucais e estão superexpressos na periodontite. Em particular, a IL-8 está ainda aumentada em indivíduos com periodontite crônica fumantes. A expressão gênica é controlada por diferentes mecanismos, incluindo a metilação de DNA. A metilação em dinucleotídeos CpG presentes em promotores de genes inibe a expressão do gene, podendo silenciar por completo a expressão gênica. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar o padrão de metilação no DNA nas regiões promotoras dos genes IL8, TLR2 e TLR4 em células bucais e sanguíneas de indivíduos com periodontite crônica fumantes e não fumantes. Também, analisar os níveis de transcritos destes genes quando encontrado diferença no padrão de metilação entre os grupos, a fim de associar o padrão de metilação com a transcrição gênica. Amostras de DNA foram purificadas de células da mucosa bucal, de tecido gengival e tecido sanguíneo de indivíduos saudáveis e com periodontite crônica fumantes e não fumantes. A metilação no gene IL8 foi investigada pela transformação com bissulfito de sódio seguida pela técnica de PCR Específica para Metilação. A análise de metilação nos genes TLR2 e TLR4 foi realizada utilizando o método de Digestão Enzimática Sensível à Metilação. Após o tratamento pelo bissulfito de sódio (IL8) ou digestão enzimática (TLRs), DNA foi amplificado por PCR, submetido à eletroforese em gel de poliacrilamida 10% corado pelo SYBR Gold. Os níveis de transcritos foram analisados utilizando PCR Quantitativo. A análise estatística foi realizada pelo teste de x2 e Kruskal-Wallis para metilação e expressão gênica, respectivamente. A correlação entre metilação versus expressão foi realizada a partir do teste de coeficiente não linear de Spearman. Os resultados indicam que para células epiteliais da mucosa bucal, a frequência de desmetilação no gene da IL8 é maior no grupo periodontite crônica, independente do hábito de fumar, em comparação ao grupo saudável (p<0,0001). Não foram detectadas diferenças no padrão de metilação no tecido gengival e sanguíneo entre os grupos. Foram encontrados maiores níveis de transcritos de IL-8 no grupo periodontite em comparação ao grupo saudável (p=0,007), entretanto, não há relação entre o padrão de metilação e expressão gênica (p>0,05). Para o gene TLR2, não foram detectadas diferenças no padrão de metilação entre os grupos em nenhum tecido estudado (p>0,05). Para o gene TLR4, foi encontrada massiva desmetilação na mucosa bucal e para tecido gengival a desmetilação foi ainda maior, principalmente dentro do grupo periodontite (p=0,03).Abstract: Chronic periodontal disease is characterized by inflammation and destruction of periodontal tissues, culminating in teeth loss. It is clear that periodontitis is influenced by host genetic, biofilm, and smoking habit. There are some important molecules involved on the pathogenesis of periodontitis. Interleukin (IL-8) is responsible for inducing chemotaxis, which is the directed migration of neutrophil to a site of inflammation. Neutrophil contributes to the elimination of the infecting bacteria and tissue destruction. Infecting bacteria are recognized by transmembrane receptors called Toll-like receptors (TLR), which recognized molecular pattern of microorganisms. The recognition of a variety of microorganisms components by individual TLRs induces innate immune responses. IL8 and TLRs are constitutively expressed by buccal cells and they are upregulated during periodontitis. Genetic transcription is regulated by different pathways, including DNA methylation. Methylation in CpG dinucleotides of gene promoters downregulates the levels of transcription and may even silence the gene transcription completely. So, the objective of this study was to analyze the pattern of DNA methylation in the promoter region of IL8, TLR2 and TLR4 genes in oral cells and blood tissue from healthy subjects and subjects with chronic periodontitis smokers and non-smokers. We also investigated the levels of mRNA expressed when different methylation status were found amoung groups. DNA samples were purified from buccal mucosa, gingival tissue and blood tissue of healthy subjects and subjects with chronic periodontitis smokers and non-smokers. Methylation of IL8 gene was investigated using sodium bisulphite modification followed by Methylation Specific PCR. Methylation analysis of TLRs genes were performed using Specific Methylation-Sensitive Restriction Enzymes. After sodium bisulphate modification (IL8) or enzymatic digestion (TLR2 and TLR4), DNA was amplified by PCR and the results were visualized after electrophoresis on 10% polyacrylamide gels stained by SYBR Gold. Levels of mRNA were analised using Real Time PCR. The statistical analysis was performed using the test of x2 and Kruskal-Wallis test for methylation status and gene expression, respectively. The correlation among methylation status versus gene expression was performed using no linear coefficient test of Spearman. The results indicate that frequency of IL8 gene demethylation is higher in individuals with chronic periodontitis, independent of smoking habit, than healthy group (p<0.0001). Differences were not detected in the methylation status in gingival tissue and blood tissue among the groups. Higher levels of IL-8 mRNA are expressed in periodontitis group than healthy group (p=0.007), however, we did not observe a relationship between IL8 gene methylation and gene expression. No significant difference was observed for TLR2 gene promoter among groups in all studied tissues (p>0.05). TLR4 gene promoter showed massive demethylation in oral mucosa and for gingival tissue it was even higher, mainly in periodontitis group (p=0.03).DoutoradoHistologia e EmbriologiaDoutor em Biologia Buco-Dental[s.n.]de Souza, Ana Paula, 1975-Santos, Maria Cristina Leme Godoy dosTrevilatto, Paula CristinaDella Coletta, RicardoMarques, Marcelo RochaUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Odontologia de Piracicaba (FOP)Programa de Pós-Graduação em Biologia Buco-DentalUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASOliveira, Naila Francis Paulo de2009info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf77 f. : il.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1611046OLIVEIRA, Naila Francis Paulo de. Analise de metilação no promotor dos genes IL8, TLR2 e TLR4 em celulas epiteliais da mucosa bucal e celulas do tecido gengival de individuos fumantes e não fumantes com periodontite cronica. 2009. 77 f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba , Piracicaba, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1611046. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/474330porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-10-06T15:37:46Zoai::474330Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-10-06T15:37:46Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
dc.title.none.fl_str_mv Analise de metilação no promotor dos genes IL8, TLR2 e TLR4 em celulas epiteliais da mucosa bucal e celulas do tecido gengival de individuos fumantes e não fumantes com periodontite cronica
DNA methylation analysis of the IL8, TLR2 and TLR4 gene promoters in oral mucosa cells and gingival tissue of smokers and non-smokers subjects with chronic periodontitis
title Analise de metilação no promotor dos genes IL8, TLR2 e TLR4 em celulas epiteliais da mucosa bucal e celulas do tecido gengival de individuos fumantes e não fumantes com periodontite cronica
spellingShingle Analise de metilação no promotor dos genes IL8, TLR2 e TLR4 em celulas epiteliais da mucosa bucal e celulas do tecido gengival de individuos fumantes e não fumantes com periodontite cronica
Oliveira, Naila Francis Paulo de
Interleucinas
Reação em cadeia da polimerase
RNA
Tabaco
Interleukin
Polymerase chain reaction
RNA
Tobacco
title_short Analise de metilação no promotor dos genes IL8, TLR2 e TLR4 em celulas epiteliais da mucosa bucal e celulas do tecido gengival de individuos fumantes e não fumantes com periodontite cronica
title_full Analise de metilação no promotor dos genes IL8, TLR2 e TLR4 em celulas epiteliais da mucosa bucal e celulas do tecido gengival de individuos fumantes e não fumantes com periodontite cronica
title_fullStr Analise de metilação no promotor dos genes IL8, TLR2 e TLR4 em celulas epiteliais da mucosa bucal e celulas do tecido gengival de individuos fumantes e não fumantes com periodontite cronica
title_full_unstemmed Analise de metilação no promotor dos genes IL8, TLR2 e TLR4 em celulas epiteliais da mucosa bucal e celulas do tecido gengival de individuos fumantes e não fumantes com periodontite cronica
title_sort Analise de metilação no promotor dos genes IL8, TLR2 e TLR4 em celulas epiteliais da mucosa bucal e celulas do tecido gengival de individuos fumantes e não fumantes com periodontite cronica
author Oliveira, Naila Francis Paulo de
author_facet Oliveira, Naila Francis Paulo de
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv de Souza, Ana Paula, 1975-
Santos, Maria Cristina Leme Godoy dos
Trevilatto, Paula Cristina
Della Coletta, Ricardo
Marques, Marcelo Rocha
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Odontologia de Piracicaba (FOP)
Programa de Pós-Graduação em Biologia Buco-Dental
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
dc.contributor.author.fl_str_mv Oliveira, Naila Francis Paulo de
dc.subject.por.fl_str_mv Interleucinas
Reação em cadeia da polimerase
RNA
Tabaco
Interleukin
Polymerase chain reaction
RNA
Tobacco
topic Interleucinas
Reação em cadeia da polimerase
RNA
Tabaco
Interleukin
Polymerase chain reaction
RNA
Tobacco
description Orientador: Ana Paula de Souza Pardo
publishDate 2009
dc.date.none.fl_str_mv 2009
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/20.500.12733/1611046
OLIVEIRA, Naila Francis Paulo de. Analise de metilação no promotor dos genes IL8, TLR2 e TLR4 em celulas epiteliais da mucosa bucal e celulas do tecido gengival de individuos fumantes e não fumantes com periodontite cronica. 2009. 77 f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba , Piracicaba, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1611046. Acesso em: 3 set. 2024.
url https://hdl.handle.net/20.500.12733/1611046
identifier_str_mv OLIVEIRA, Naila Francis Paulo de. Analise de metilação no promotor dos genes IL8, TLR2 e TLR4 em celulas epiteliais da mucosa bucal e celulas do tecido gengival de individuos fumantes e não fumantes com periodontite cronica. 2009. 77 f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba , Piracicaba, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1611046. Acesso em: 3 set. 2024.
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/474330
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
77 f. : il.
dc.publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
instname_str Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron_str UNICAMP
institution UNICAMP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.mail.fl_str_mv sbubd@unicamp.br
_version_ 1809189021101850624

Registros relacionados