Composição química, atividade antioxidante e toxicológica de Chaptalia nutans (L.) Polack

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Autor(a) principal: Souza, Letiele Bruck de
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UNIPAMPA
Texto Completo: http://dspace.unipampa.edu.br:8080/jspui/handle/riu/5462
Resumo: Chaptalia nutans é uma espécie amplamente utilizada na medicina popular no sul do Brasil como laxantes, béquico, e especialmente em preparações tópicas para traumatismos, feridas e hemorragias. Neste sentido, objetivou-se avaliar a constituição química do extrato metanólico das folhas e raízes de C. nutans, bem como verificar a atividade antioxidante em diferentes métodos, antimicrobiana e a toxicidade dos extratos utilizando diferentes modelos. Para elucidar os compostos presentes no extrato, foi realizada uma triagem fitoquímica, bem como a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, acoplada a Detector de Diodos e Espectrometria de Massa (HPLC-DAD-MS). A atividade antimicrobiana, dos extratos brutos e das frações, foi avaliada individualmente contra bactérias e fungos pelo teste de microdiluição em caldo. A capacidade antioxidante foi verificada pelo radical 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH), capacidade de redução de ferro (FRAP), substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), proteína carbonil e diacetato de dicloro-di-hidro-fluoresceína (DCFH-DA). Como teste preliminar de toxicidade, foi utilizado o bioensaio de Artemia salina. Em seguida, foi avaliada a citotoxicidade e genotoxicidade do extrato através do sistema de teste Allium cepa e, por fim, um modelo experimental mais complexo, Drosophila melanogaster, foi utilizado para avaliar compostos neurotóxicos. A presença de um grande número de fitoconstituintes ativos, como alcalóides, cumarinas, flavonóides, terpenos e principalmente compostos fenólicos, pode justificar a capacidade antioxidante dos extratos, que em concentrações de 0,1, 1 e 10 mg/mL demonstraram potencial para proteger as células dos danos lipídico e preteico, bem como a neutralização dos radicais peroxilas. O extrato das folhas na concentração de 1000μg/mL e o extrato das raízes nas três concentrações testadas 10, 100 e 1000 μg/mL mostraram-se extremamente promissores na diminuição dos níveis de malondialdeído (MDA). O extrato bruto das folhas de C. nutans não foi eficaz contra os microrganismos testados, somente a fração hexânica, na concentração de 1000μg/mL, inibiu com expressividade os microrganismos: Staphylococcus. epidermidis, Candida tropicalis, Candinda glabrata e Candida krusei. Com relação à toxicidade dos extratos, a C. nutans não apresentou ser tóxica nas concentrações testadas nos diferentes modelos in vivo, não apresentando citotoxicidade, genotoxicidade e neurotoxicidade. As raízes, no modelo A. cepa, na maior concentração apresentaram capacidade de proteção de 50% nas anormalidades cromossômicas causadas pelo glifosato, como também protegeu em 80%, no ensaio D. melanogaster nas três concentrações testadas, do déficit locomotor causado pelo Paraquat®. As folhas e as raízes de C. nutans apresentaram resultados promissores, abrindo caminho para o possível desenvolvimento de antioxidantes naturais após investigações mais específicas, elucidando os mecanimos de ação dos extratos e elucidação da reduação de fatores disfuncionais envolvidos no processo de neurodegeneração.
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Para elucidar os compostos presentes no extrato, foi realizada uma triagem fitoquímica, bem como a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, acoplada a Detector de Diodos e Espectrometria de Massa (HPLC-DAD-MS). A atividade antimicrobiana, dos extratos brutos e das frações, foi avaliada individualmente contra bactérias e fungos pelo teste de microdiluição em caldo. A capacidade antioxidante foi verificada pelo radical 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH), capacidade de redução de ferro (FRAP), substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), proteína carbonil e diacetato de dicloro-di-hidro-fluoresceína (DCFH-DA). Como teste preliminar de toxicidade, foi utilizado o bioensaio de Artemia salina. Em seguida, foi avaliada a citotoxicidade e genotoxicidade do extrato através do sistema de teste Allium cepa e, por fim, um modelo experimental mais complexo, Drosophila melanogaster, foi utilizado para avaliar compostos neurotóxicos. A presença de um grande número de fitoconstituintes ativos, como alcalóides, cumarinas, flavonóides, terpenos e principalmente compostos fenólicos, pode justificar a capacidade antioxidante dos extratos, que em concentrações de 0,1, 1 e 10 mg/mL demonstraram potencial para proteger as células dos danos lipídico e preteico, bem como a neutralização dos radicais peroxilas. O extrato das folhas na concentração de 1000μg/mL e o extrato das raízes nas três concentrações testadas 10, 100 e 1000 μg/mL mostraram-se extremamente promissores na diminuição dos níveis de malondialdeído (MDA). O extrato bruto das folhas de C. nutans não foi eficaz contra os microrganismos testados, somente a fração hexânica, na concentração de 1000μg/mL, inibiu com expressividade os microrganismos: Staphylococcus. epidermidis, Candida tropicalis, Candinda glabrata e Candida krusei. Com relação à toxicidade dos extratos, a C. nutans não apresentou ser tóxica nas concentrações testadas nos diferentes modelos in vivo, não apresentando citotoxicidade, genotoxicidade e neurotoxicidade. As raízes, no modelo A. cepa, na maior concentração apresentaram capacidade de proteção de 50% nas anormalidades cromossômicas causadas pelo glifosato, como também protegeu em 80%, no ensaio D. melanogaster nas três concentrações testadas, do déficit locomotor causado pelo Paraquat®. As folhas e as raízes de C. nutans apresentaram resultados promissores, abrindo caminho para o possível desenvolvimento de antioxidantes naturais após investigações mais específicas, elucidando os mecanimos de ação dos extratos e elucidação da reduação de fatores disfuncionais envolvidos no processo de neurodegeneração.Chaptalia nutans is a species widely used in popular medicine in southern Brazil as laxatives, antitussive, and especially in topical preparations for trauma, wounds and hemorrhages. The objective was to evaluate the chemical constitution of the methanolic extract of the leaves and roots of C. nutans, as well as to verify the antioxidant activity in different methods, antimicrobial and the toxicity of the extracts using different models. To elucidate the compounds present in the extract, a phytochemical screening was performed, as well as High Performance Liquid Chromatography, coupled to Diodes Detector and Mass Spectrometry (HPLC-DAD-MS). The antimicrobial activity of the crude extracts and fractions was individually evaluated against bacteria and fungus by the broth microdilution test. The antioxidant capacity was verified by the radical 2,2-diphenyl-1-picrilhidrazil (DPPH), iron reduction capacity (FRAP), substances reactive to thiobarbituric acid (TBARS), carbonyl rotein and dichloro-dihydro-fluorescein diacetate (DCFH-DA). As a preliminary toxicity test, the Artemia salina bioassay was used. After that, the cytotoxicity and genotoxicity of the extract was evaluated using the Allium cepa test system and, finally, a more complex experimental model, Drosophila melanogaster, was used to evaluate neurotoxic compounds. The presence of a large number of active phytochemicals, such as alkaloids, coumarins, flavonoids, terpenes and mainly phenolic compounds, may justify the antioxidant capacity of the extracts, which in concentrations of 0.1, 1 and 10 mg/mL demonstrated the potential to protect the cells from lipid and protein damage, as well as the neutralization of peroxy radicals. Leaf extract at a concentration of 1000 μg/mL and root extract at the three tested concentrations 10, 100 and 1000 μg/mL proved to be extremely promising in decreasing malondialdehyde (MDA) levels. The crude extract of the leaves of C. nutans was not effective against the tested microorganisms, only the hexane fraction, at a concentration of 1000μg/mL, significantly inhibited the microorganisms: Staphylococcus epidermidis, Candida tropicalis, Candinda glabrata and Candida krusei and the chloroform fraction of the root at a concentration of 500μg / mL, inhibited only Eschechiria coli. Regarding to the toxicity of the extracts, C. nutans was not toxic at the concentrations tested in the different models in vivo, with no cytotoxicity, genotoxicity and neurotoxicity. The roots, in the A. cepa model, in the highest concentration showed a 50% protection capacity against chromosomal abnormalities caused by glyphosate, as well as 80% protection, in the D. melanogaster test in the three tested concentrations, from the locomotor deficit caused by Paraquat®. The leaves and roots of C. nutans showed promising results, leading the way for the possible development of natural antioxidants after more specific investigations, elucidating the mechanisms of action of the extracts and elucidating the reduction of dysfunctional factors involved in the neurodegeneration process.porUniversidade Federal do PampaDoutorado em BioquímicaUNIPAMPABrasilCampus UruguaianaCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICASAllium cepaArtemia salinaAsteraceaeCompostos fenólicosEstresse oxidativoArtemia salinaDrosophila melanogasterAllium cepaAsteraceaePhenolic compoundsDrosophila melanogasterOxidative stressComposição química, atividade antioxidante e toxicológica de Chaptalia nutans (L.) PolackChemical composition, antioxidant and toxicological activity of Chaptalia nutans (L.) 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