Estudo químico de fungos da rizosfera de Senna spectabilis utilizando abordagem OSMAC e ferramentas analíticas do estado da arte para anotação e caracterização de metabólitos

• Autor(a) principal: Vieira, Natália Carolina
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/192846
• topic: Rizosfera; Senna spectabilis; Fusarium solani; Purpureocillium lilacinum; GNPS; UNIFI; RMN; OSMAC; Produtos naturais; Espectrometria de massas; Natural Products; Mass Spectrometry; NMR; Rhizosphere

A utilização de produtos naturais pela humanidade, como agentes terapêuticos, é descrita desde primórdios da antiguidade e representam um importante aliado no tratamento de doenças. Com isso a busca por novas ferramentas analíticas mais robustas, com abordagem metabolômica se faz necessária, de forma a otimizar e acelerar a busca por novas moléculas e substâncias com atividade biológica promissora. Nesse contexto, esse trabalho tem como alvo de estudo, os fungos Fusarium solani e Purpureocillium lilacinum isolados da rizosfera de Senna spectabilis. Essas espécies de microrganismos apresentam muitos estudos químicos relatados na literatura, o que influenciou o interesse em realizar os estudos de OSMAC (One Strain Many Compounds). Para, assim, verificar a variação metabólica que acontece com esses fungos em diferentes tipos de cultivo (variando meio de cultura e agitação) incluindo o co-cultivo. Para os extratos obtidos também foram realizados os ensaios biológicos citotóxico e antibacteriano. Foram utilizadas ferramentas analíticas do estado da arte como GC-MS (Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massas) e LC-MS (Cromatografia Líquida acoplada a Espectrometria de Massas) fazendo uso das ferramentas de bioinformática Molecular Networking (ou Rede Molecular) com a plataforma GNPS (Global Natural Product Social Molecular Networking) e o UNIFI (Sistema de informação científica – Waters Corporation). A espectrometria de massas (MS) foi uma grande aliada que ajudou a demonstrar a variação do perfil de metabólitos desses microrganismos em diferentes cultivos, no qual foi possível anotar 101 metabólitos nos diferentes extratos avaliados. As substâncias presentes nos extratos que não puderam ser anotadas, foram purificadas levando à caracterização 5 substâncias inéditas, sendo elas γ-pironas, α-pironas e um dipeptídeo. Uma das substâncias isoladas, 6-(11-(hidroxmietil)-9-metiloct-7-en-7-il)-2-metóxi-4H-piran-4-ona, foi evidenciada nos extratos de co-cultivo e de F. solani. Essa substância apresentou maior concentração nos extratos de co-cultivo de acordo com os resultados de quantificação, mostrando um outro tipo de evidência da OSMAC, que aumenta a produção de substâncias ao variar o tipo de cultivo. Portanto, a utilização de abordagens metabolômicas conseguiu guiar o estudo para caracterização de metabólitos inéditos, mostrando uma alternativa para abordagens reducionistas.