Dosagem de etanol utilizando alcool desidrogenase de levedura de panificação
Autor(a) principal: | |
---|---|
Data de Publicação: | 2006 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UNESP |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/11449/88681 |
Resumo: | O presente trabalho descreve e compara duas metodologias enzimáticas de dosagem de etanol (métodos UV e colorimétrico), que utilizam desidrogenase alcoólica (álcool: NAD+: oxidoredutase EC 1.1.1.1) de fermento de panificação (Mauri Brasil Ind. Comp. e Imp. Ltda), adquirida no comércio na forma desidratada. A atividade da álcool desidrogenase (ADH) presente no extrato bruto de levedura de panificação, da ordem de 5,66 U/mL, foi utilizada nos ensaios colorimétricos, enquanto que nos ensaios no ultravioleta (UV), atividades ao redor de 30 U/mL foram obtidas através da otimização das condições de extração e purificação parcial da ADH. A estabilidade da ADH foi mantida durante 2 meses, na forma liofilizada a 4oC (retenção de 96,2% de sua atividade), na presença de 1 mM de azida de sódio. A mesma preparação enzimática, reconstituída em PEG 15% e armazenada durante 12 meses em freezer (-18oC), apresentou retenção de 50% de sua atividade até 2 meses. O método ultravioleta de dosagem de etanol (detecção na faixa de 2,3 x 10-4 g/L a 6,91 x 10-3 g/L ou 5 æM a 150 æM) baseia-se na conversão enzimática do etanol a acetaldeído, através de reação de óxido-redução, tendo o NAD+ como aceptor de elétrons. O NADH formado pela reação é quantificado com leituras espectrofométricas a 340 nm, conforme descrito por Gattás (2002). Uma preparação enzimática parcialmente purificada e diluída foi utilizada na quantificação de etanol em diferentes bebidas, mostrando desvios dos teores alcoólicos de no máximo 2,1% quando comparados às especificações do produtor. O ensaio de etanol em vinho foi realizado com recuperação da ordem de 99,25% em amostra contendo, originalmente, 249,65 g/L de etanol. O método colorimétrico de dosagem de etanol (detecção na faixa de 4,6 x 10-2 g/L a 23,0 x 10-2 g/L ou 1000 æM a 5000 æM)... |
id |
UNSP_a112ca1df7e0ce2f4418fb2efc6bfcfe |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:repositorio.unesp.br:11449/88681 |
network_acronym_str |
UNSP |
network_name_str |
Repositório Institucional da UNESP |
repository_id_str |
2946 |
spelling |
Dosagem de etanol utilizando alcool desidrogenase de levedura de panificaçãoAlcool desidrogenaseLevedura de panificaçãoMétodos de dosagemAlcohol dehydrogenaseBakerþs yeastMethods of dosageO presente trabalho descreve e compara duas metodologias enzimáticas de dosagem de etanol (métodos UV e colorimétrico), que utilizam desidrogenase alcoólica (álcool: NAD+: oxidoredutase EC 1.1.1.1) de fermento de panificação (Mauri Brasil Ind. Comp. e Imp. Ltda), adquirida no comércio na forma desidratada. A atividade da álcool desidrogenase (ADH) presente no extrato bruto de levedura de panificação, da ordem de 5,66 U/mL, foi utilizada nos ensaios colorimétricos, enquanto que nos ensaios no ultravioleta (UV), atividades ao redor de 30 U/mL foram obtidas através da otimização das condições de extração e purificação parcial da ADH. A estabilidade da ADH foi mantida durante 2 meses, na forma liofilizada a 4oC (retenção de 96,2% de sua atividade), na presença de 1 mM de azida de sódio. A mesma preparação enzimática, reconstituída em PEG 15% e armazenada durante 12 meses em freezer (-18oC), apresentou retenção de 50% de sua atividade até 2 meses. O método ultravioleta de dosagem de etanol (detecção na faixa de 2,3 x 10-4 g/L a 6,91 x 10-3 g/L ou 5 æM a 150 æM) baseia-se na conversão enzimática do etanol a acetaldeído, através de reação de óxido-redução, tendo o NAD+ como aceptor de elétrons. O NADH formado pela reação é quantificado com leituras espectrofométricas a 340 nm, conforme descrito por Gattás (2002). Uma preparação enzimática parcialmente purificada e diluída foi utilizada na quantificação de etanol em diferentes bebidas, mostrando desvios dos teores alcoólicos de no máximo 2,1% quando comparados às especificações do produtor. O ensaio de etanol em vinho foi realizado com recuperação da ordem de 99,25% em amostra contendo, originalmente, 249,65 g/L de etanol. O método colorimétrico de dosagem de etanol (detecção na faixa de 4,6 x 10-2 g/L a 23,0 x 10-2 g/L ou 1000 æM a 5000 æM)...The present work describes and compares two enzymatic methodology of ethanol dosage (UV and colorimetric methods), that use alcohol dehydrogenase (alcohol: NAD+: oxidoredutase EC 1.1.1.1) of baker s yeast (Mauri Brasil Ind. Comp. e Imp. Ltda) acquired in the commerce in the dry form. The activity of the alcohol dehydrogenase (ADH) at around 5.66 U/mL present in the crude extract of baker s yeast was used in the colorimetric assay, whereas activities at around of 30 U/mL were obtained through the optimization of the extraction conditions and partial purification of ADH in the ultraviolet assay (UV). The stability of liophilized ADH at 4ºC was maintained for 2 months (retention of 96.2% of activity) in the presence of 1 mM sodium azide. The same enzymatic preparation reconstituted in PEG 15% and stored for 12 months in freezer (-18ºC) presented retention of 50% of your activity up to 2 months. The ultraviolet method of ethanol dosage (detection range of 2.3 x10-4 g/L to 6.91 x 10-3 g/L or 5 æM to 150 æM) is based on the enzymatic conversion of ethanol into acetaldehyde, through oxido-reduction reaction with NAD+ as the aceptor of electrons. The NADH formed by the reaction was quantified spectrophotometrically at 340 nm, as described by Gattás (2002). A partially purified and diluted enzymatic preparation was used for ethanol quantification in different beverages, showing alcoholic contents deviations up to 2.1% when compared to the specifications of the manufacturer. The ethanol assay in wine was accomplished with a recovery at around 99.25% in sample originally containing 249.65 g/L of ethanol. The colorimetric method of ethanol dosage (detection range of 4.6 x 10-2 g/L to 23.0 x 10-2 g/L or 1000 æM to 5000 æM) uses the color reagents system MTT/PMS dissolved in saline phosphate buffer (PBS), determined spectrophotometrically at 570-655 nm... (Complete abstract, click electronic address below)Universidade Estadual Paulista (UNESP)Universidade Estadual Paulista (Unesp)Gattas, Edwil Aparecida de Lucca [UNESP]Peres, Maristela de Freitas Sanches [UNESP]Universidade Estadual Paulista (Unesp)Reis, Juliana Pereira Zanon [UNESP]2014-06-11T19:23:35Z2014-06-11T19:23:35Z2006-07-07info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis66 f.application/pdfREIS, Juliana Pereira Zanon. Dosagem de etanol utilizando alcool desidrogenase de levedura de panificação. 2006. 66 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Ciências Farmacêuticas, 2006.http://hdl.handle.net/11449/88681000470288reis_jpz_me_arafcf.pdf33004030055P64006598610021833Alephreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESPporinfo:eu-repo/semantics/openAccess2024-06-24T17:43:23Zoai:repositorio.unesp.br:11449/88681Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestopendoar:29462024-08-05T22:32:26.373123Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false |
dc.title.none.fl_str_mv |
Dosagem de etanol utilizando alcool desidrogenase de levedura de panificação |
title |
Dosagem de etanol utilizando alcool desidrogenase de levedura de panificação |
spellingShingle |
Dosagem de etanol utilizando alcool desidrogenase de levedura de panificação Reis, Juliana Pereira Zanon [UNESP] Alcool desidrogenase Levedura de panificação Métodos de dosagem Alcohol dehydrogenase Bakerþs yeast Methods of dosage |
title_short |
Dosagem de etanol utilizando alcool desidrogenase de levedura de panificação |
title_full |
Dosagem de etanol utilizando alcool desidrogenase de levedura de panificação |
title_fullStr |
Dosagem de etanol utilizando alcool desidrogenase de levedura de panificação |
title_full_unstemmed |
Dosagem de etanol utilizando alcool desidrogenase de levedura de panificação |
title_sort |
Dosagem de etanol utilizando alcool desidrogenase de levedura de panificação |
author |
Reis, Juliana Pereira Zanon [UNESP] |
author_facet |
Reis, Juliana Pereira Zanon [UNESP] |
author_role |
author |
dc.contributor.none.fl_str_mv |
Gattas, Edwil Aparecida de Lucca [UNESP] Peres, Maristela de Freitas Sanches [UNESP] Universidade Estadual Paulista (Unesp) |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Reis, Juliana Pereira Zanon [UNESP] |
dc.subject.por.fl_str_mv |
Alcool desidrogenase Levedura de panificação Métodos de dosagem Alcohol dehydrogenase Bakerþs yeast Methods of dosage |
topic |
Alcool desidrogenase Levedura de panificação Métodos de dosagem Alcohol dehydrogenase Bakerþs yeast Methods of dosage |
description |
O presente trabalho descreve e compara duas metodologias enzimáticas de dosagem de etanol (métodos UV e colorimétrico), que utilizam desidrogenase alcoólica (álcool: NAD+: oxidoredutase EC 1.1.1.1) de fermento de panificação (Mauri Brasil Ind. Comp. e Imp. Ltda), adquirida no comércio na forma desidratada. A atividade da álcool desidrogenase (ADH) presente no extrato bruto de levedura de panificação, da ordem de 5,66 U/mL, foi utilizada nos ensaios colorimétricos, enquanto que nos ensaios no ultravioleta (UV), atividades ao redor de 30 U/mL foram obtidas através da otimização das condições de extração e purificação parcial da ADH. A estabilidade da ADH foi mantida durante 2 meses, na forma liofilizada a 4oC (retenção de 96,2% de sua atividade), na presença de 1 mM de azida de sódio. A mesma preparação enzimática, reconstituída em PEG 15% e armazenada durante 12 meses em freezer (-18oC), apresentou retenção de 50% de sua atividade até 2 meses. O método ultravioleta de dosagem de etanol (detecção na faixa de 2,3 x 10-4 g/L a 6,91 x 10-3 g/L ou 5 æM a 150 æM) baseia-se na conversão enzimática do etanol a acetaldeído, através de reação de óxido-redução, tendo o NAD+ como aceptor de elétrons. O NADH formado pela reação é quantificado com leituras espectrofométricas a 340 nm, conforme descrito por Gattás (2002). Uma preparação enzimática parcialmente purificada e diluída foi utilizada na quantificação de etanol em diferentes bebidas, mostrando desvios dos teores alcoólicos de no máximo 2,1% quando comparados às especificações do produtor. O ensaio de etanol em vinho foi realizado com recuperação da ordem de 99,25% em amostra contendo, originalmente, 249,65 g/L de etanol. O método colorimétrico de dosagem de etanol (detecção na faixa de 4,6 x 10-2 g/L a 23,0 x 10-2 g/L ou 1000 æM a 5000 æM)... |
publishDate |
2006 |
dc.date.none.fl_str_mv |
2006-07-07 2014-06-11T19:23:35Z 2014-06-11T19:23:35Z |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/masterThesis |
format |
masterThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
REIS, Juliana Pereira Zanon. Dosagem de etanol utilizando alcool desidrogenase de levedura de panificação. 2006. 66 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Ciências Farmacêuticas, 2006. http://hdl.handle.net/11449/88681 000470288 reis_jpz_me_arafcf.pdf 33004030055P6 4006598610021833 |
identifier_str_mv |
REIS, Juliana Pereira Zanon. Dosagem de etanol utilizando alcool desidrogenase de levedura de panificação. 2006. 66 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Ciências Farmacêuticas, 2006. 000470288 reis_jpz_me_arafcf.pdf 33004030055P6 4006598610021833 |
url |
http://hdl.handle.net/11449/88681 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.format.none.fl_str_mv |
66 f. application/pdf |
dc.publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Estadual Paulista (Unesp) |
publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Estadual Paulista (Unesp) |
dc.source.none.fl_str_mv |
Aleph reponame:Repositório Institucional da UNESP instname:Universidade Estadual Paulista (UNESP) instacron:UNESP |
instname_str |
Universidade Estadual Paulista (UNESP) |
instacron_str |
UNESP |
institution |
UNESP |
reponame_str |
Repositório Institucional da UNESP |
collection |
Repositório Institucional da UNESP |
repository.name.fl_str_mv |
Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP) |
repository.mail.fl_str_mv |
|
_version_ |
1808129434834698240 |