Análise de genes de Azospirillum amazonense envolvidos na resposta ao estresse oxidativo

• Autor(a) principal: Cecagno, Ricardo
• Data de Publicação: 2007
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/87129
• topic: Azospirillum amazonense

O surgimento e conseqüente acúmulo de O2 livre na atmosfera a partir do início da atividade fotossintética foi um evento que causou extinções em massa no nosso planeta. Apesar do grande aumento da quantidade de energia disponibilizado pela utilização do O2 na oxidação dos alimentos em comparação com a fermentação, a toxicidade do mesmo causou uma pressão seletiva nos organismos e o desenvolvimento de atividades de proteção contra o ataque do oxigênio e seus radicais aos clusters metálicos de enzimas de atividades essenciais como a nitrogenase e outras biomoléculas. Trabalhos demonstraram que o microrganismo diazotrófico Azospirillum amazonense, apesar de pouco estudado, está presente em grande quantidade no solo de pastagens e culturas de arroz, trigo, milho e cana-de-açúcar no Brasil, e além de estar adaptado à acidez do solo, produz importantes hormônios vegetais em associação com as mesmas. O presente estudo tem o objetivo de contribuir pa ra o entendimento da alta tolerância de A. amazonense ao estresse por oxigênio e seus radicais. A utilização do herbicida Gramoxone (Singenta) como indutor da resposta bacteriana resultou na resistência pelo microrganismo a concentrações maiores do que 100μM de paraquat. A metodologia de Representational Difference Analysis (cDNARDA) como forma de identificar genes diferencialmente expressos pela bactéria nessa condição resultou no isolamento de seis genes envolvidos direta e indiretamente no processo sendo um regulador transcricional da família GntR; uma alcanosulfonato monooxigenase; uma epimerase/desidratase dependente de NAD e uma serina protease. Este é o primeiro trabalho que utiliza emulsão fenólica em ciclos oscilatórios de temperatura (OSPERT) associada a cDNA-RDA. A metodologia utilizada mostrou ser funcional para as condições testadas sendo uma grande ferramenta para o estudo de expressão diferencial em organismos cujo genoma não é conhecido.