Avaliação de três métodos de extração de DNA de material parafinado para amplificação de DNA genômico pela técnica da PCR
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Data de Publicação: | 2001 |
Outros Autores: | , , |
Tipo de documento: | Artigo |
Idioma: | eng |
Título da fonte: | Pesquisa odontológica brasileira (Online) |
Texto Completo: | https://www.revistas.usp.br/pob/article/view/42960 |
Resumo: | Existem na literatura vários protocolos para extração de DNA genômico a partir de material fixado em formol e embebido em parafina. A obtenção de DNA genômico é importante para realização de experimentos em biologia molecular, dentre eles a PCR. Este trabalho teve por objetivo otimizar a extração de DNA genômico a partir de material fixado (hiperplasia fibrosa inflamatória) e não-fixado (mucosa bucal normal) em formol, comparando-se três metodologias diferentes: fenol com digestão enzimática, partículas de sílica com e sem digestão enzimática. Para amplificação do DNA pela técnica da PCR, utilizou-se iniciadores para o éxon 7 da citoqueratina humana tipo 14. O sucesso da amplificação foi verificado pela eletroforese do produto em gel de poliacrilamida 8% contendo glicerol 5% corado com prata. Obteve-se amplificação do DNA genômico extraído com fenol/digestão enzimática e com partículas de sílica/digestão enzimática, para ambos tecidos utilizados. O método padronizado tem potencial para auxiliar no diagnóstico histopatológico, assim como no estudo retrospectivo de material de arquivo. |
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Avaliação de três métodos de extração de DNA de material parafinado para amplificação de DNA genômico pela técnica da PCREvaluation of three methods of DNA extraction from paraffin-embedded material for the amplification of genomic DNA by means of the PCR techniquePolymerase chain reactionKeratinDNAReação em cadeia por polimeraseQueratinaExistem na literatura vários protocolos para extração de DNA genômico a partir de material fixado em formol e embebido em parafina. A obtenção de DNA genômico é importante para realização de experimentos em biologia molecular, dentre eles a PCR. Este trabalho teve por objetivo otimizar a extração de DNA genômico a partir de material fixado (hiperplasia fibrosa inflamatória) e não-fixado (mucosa bucal normal) em formol, comparando-se três metodologias diferentes: fenol com digestão enzimática, partículas de sílica com e sem digestão enzimática. Para amplificação do DNA pela técnica da PCR, utilizou-se iniciadores para o éxon 7 da citoqueratina humana tipo 14. O sucesso da amplificação foi verificado pela eletroforese do produto em gel de poliacrilamida 8% contendo glicerol 5% corado com prata. Obteve-se amplificação do DNA genômico extraído com fenol/digestão enzimática e com partículas de sílica/digestão enzimática, para ambos tecidos utilizados. O método padronizado tem potencial para auxiliar no diagnóstico histopatológico, assim como no estudo retrospectivo de material de arquivo.There are several protocols reported in the literature for the extraction of genomic DNA from formalin-fixed paraffin-embedded samples. Genomic DNA is utilized in molecular analyses, including PCR. This study compares three different methods for the extraction of genomic DNA from formalin-fixed paraffin-embedded (inflammatory fibrous hyperplasia) and non-formalin-fixed (normal oral mucosa) samples: phenol with enzymatic digestion, and silica with and without enzymatic digestion. The amplification of DNA by means of the PCR technique was carried out with primers for the exon 7 of human keratin type 14. Amplicons were analyzed by means of electrophoresis in an 8% polyacrylamide gel with 5% glycerol, followed by silver-staining visualization. The phenol/enzymatic digestion and the silica/enzymatic digestion methods provided amplicons from both tissue samples. The method described is a potential aid in the establishment of the histopathologic diagnosis and in retrospective studies with archival paraffin-embedded samples.Universidade de São Paulo. Faculdade de Odontologia2001-12-01info:eu-repo/semantics/articleinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionArtigo avaliado pelos Paresapplication/pdfhttps://www.revistas.usp.br/pob/article/view/4296010.1590/S1517-74912001000400008Pesquisa Odontológica Brasileira; v. 15 n. 4 (2001); 314-318Pesquisa Odontológica Brasileira; Vol. 15 No. 4 (2001); 314-318Pesquisa Odontológica Brasileira; Vol. 15 Núm. 4 (2001); 314-3181678-80791517-7491reponame:Pesquisa odontológica brasileira (Online)instname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPenghttps://www.revistas.usp.br/pob/article/view/42960/46585MESQUITA, Ricardo AlvesANZAI, Evelyn K.OLIVEIRA, Rogério NogueiraNUNES, Fábio Daumasinfo:eu-repo/semantics/openAccess2012-09-18T11:32:52Zoai:revistas.usp.br:article/42960Revistawww.scielo.br/pobPUBhttps://old.scielo.br/oai/scielo-oai.php||pob@edu.usp.br1678-80791517-7491opendoar:2024-04-29T09:45:14.860829Pesquisa odontológica brasileira (Online) - Universidade de São Paulo (USP)true |
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