Incidência de enteroparasitas com caracterização molecular de Cryptosporidium spp. em diferentes comunidades brasileiras

• Autor(a) principal: Gonçalves, Elenice Messias do Nascimento
• Data de Publicação: 2007
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5144/tde-20082007-141620/
• topic: Cryptosporidium/classificação; Cryptosporidium/classification; Doenças parasitárias; Epidemiologia molecular; Molecular epidemiology; Parasitic disease; Polymerase chain reaction; Reação em cadeia da polimerase

O estudo foi desenvolvido com o intuito de detectar e caracterizar Cryptosporidium spp. em pacientes de diferentes comunidades brasileiras, atendidos no HC-FMUSP. A amostra utilizada foi de 2.410 amostras fecais, provenientes de exames realizados na Divisão de Laboratório Central do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (DLC-HCFMUSP), no período de 2000 a 2006. A maioria das amostras (96,82%) era oriunda do Estado de São Paulo (DIR 1 a DIR 24), sendo que 56,18% eram do Município de São Paulo (DIR 1). Foi avaliada, também, sua relação com outros enteroparasitos, com dados clínicos e localização geográfica. Todas as amostras fecais foram submetidas a métodos de concentração para pesquisa de enteroparasitos, com resultado positivo de 4,6% e 27,8% para helmintos e protozoários, respectivamente. Oocistos de Cryptosporidium spp. foram detectados, por microscopia óptica após coloração pelo método de Kinyoun em 233 amostras fecais (9,7%), semi quantificados e medidos. A maioria das amostras apresentava pequena quantidade de oocistos. Nos isolados biológicos obtidos foi feito a extração do DNA genômico utilizando 223 amostras fecais preservadas a 20°C negativos, incubadas com solução de lise (Tris-HCl + EDTA + SDS 10% + beta mercaptoetanol + PVP) e proteinase K seguida de extração com fenol-clorofórmio-álcool isoamílico (25:24:1) em tubo Phase Lock Gel light . A amplificação do DNA alvo foi feita com PCR dupla, tendo como marcador genético o gene 18 SSUrRNA. Os produtos da amplificação (amplicons) da PCR - Dupla foram digeridos pelas enzimas de restrição: TaqI e AseI. A PCR dupla confirmou Cryptosporidium em 37,2% (83/223) das amostras fecais analisadas, com sua caracterização em 62,7% (52/83) após a digestão de seus produtos. Foram observados perfis característicos de C. hominis (88,5%), C. parvum (3,8%), Cryptosporidium não parvum não hominis (34,9%) e infecções mistas com C. hominis (27,2%). Os não caracterizados foram considerados Cryptosporidium spp. Cryptosporidium spp. apresentou associações significativas com todos os grupos de riscos avaliados e diarréia. Foi observada correlação estatisticamente significativa entre tamanho dos oocistos detectados na microscopia e os genótipos Cryptosporidium hominis e Cryptosporidium não hominis não parvum. Conclui-se que diferentes genótipos de Cryptosporidium circulam em uma mesma região geográfica, infectando indivíduos tanto imunocompetentes como imunodeprimidos. A maior freqüência de Cryptosporidium hominis indica a rota fecal oral como a mais importante na transmissão desta infecção. Métodos moleculares de genotipagem são essenciais para estudos epidemiológicos deste organismo.