Estabelecimento do protocolo de armazenamento e recolonização dos tecidos tímicos descelularizados

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Dias, Alana dos Santos
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
Texto Completo: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5141/tde-14042023-164226/
Resumo: A síndrome de DiGeorge é ocasionada pela deleção do cromossomo 22q11.2, acarretando na ausência total ou parcial do timo. Aproximadamente 1% dos pacientes diagnosticados com a síndrome de DiGeorge tem parcial ou completa ausência de timo na forma completa da síndrome. Estes pacientes requerem tratamento urgente para reconstituírem a imunidade com células T.Transplante tímico é uma promessa em investigação para a reconstituição das funções tímicas em crianças com atimia congênita. Neste estudo, foi demonstrado uma possível otimização na preparação dos fragmentos tímicos através de depleção prévia de células de timócitos e leucócitos, para agilizar o transplante tímico. Fragmentos tímicos previamente após depleçãos de timócitos e leucócitos foram criopreservados com 5% Dextran FP 40, 5% Me2SO, 5% SFB, para preservar a estrutura do tecido tímico, e armazenados em nitrogênio líquido a -196°C durante 30 dias e um ano. A arquitetura tecidual foi preservada durante estes períodos, incluindo as células epiteliais medulares tímicas (mTEC), células epiteliais corticais (cTEC), células endoteliais e o corpúsculo de Hasall. Estas estruturas se mantiveram integras e viáveis após o descongelamento em cada período. Com os resultados do protocolo de criopreservação, foi possível fazer a recolonização com injeções com 3x106 timócitos/mL de um doador, no tecido tímico após depleção de timócitos e leucócitos e criopreservado por um ano, demonstrando a capacidade destes fragmentos para realizar a maturação dos linfócitos T. Esses dados, abrem a possibilidade para armazenar fragmentos tímicos prontos para o transplante imediato em pacientes com síndrome de DiGeorge ou fenótipo atípico (Omenn-like)
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spelling Estabelecimento do protocolo de armazenamento e recolonização dos tecidos tímicos descelularizadosEstablishment of the protocol for storage and recolonization of decellularized thymic tissuesCriopreservaçãoCryopreservationDepleção leucocitáriaDiGeorge syndromeLeukocyte depletionSíndrome de DiGeorgeTecido tímicoThymocytesThymus transplantationTransplante tímicoA síndrome de DiGeorge é ocasionada pela deleção do cromossomo 22q11.2, acarretando na ausência total ou parcial do timo. Aproximadamente 1% dos pacientes diagnosticados com a síndrome de DiGeorge tem parcial ou completa ausência de timo na forma completa da síndrome. Estes pacientes requerem tratamento urgente para reconstituírem a imunidade com células T.Transplante tímico é uma promessa em investigação para a reconstituição das funções tímicas em crianças com atimia congênita. Neste estudo, foi demonstrado uma possível otimização na preparação dos fragmentos tímicos através de depleção prévia de células de timócitos e leucócitos, para agilizar o transplante tímico. Fragmentos tímicos previamente após depleçãos de timócitos e leucócitos foram criopreservados com 5% Dextran FP 40, 5% Me2SO, 5% SFB, para preservar a estrutura do tecido tímico, e armazenados em nitrogênio líquido a -196°C durante 30 dias e um ano. A arquitetura tecidual foi preservada durante estes períodos, incluindo as células epiteliais medulares tímicas (mTEC), células epiteliais corticais (cTEC), células endoteliais e o corpúsculo de Hasall. Estas estruturas se mantiveram integras e viáveis após o descongelamento em cada período. Com os resultados do protocolo de criopreservação, foi possível fazer a recolonização com injeções com 3x106 timócitos/mL de um doador, no tecido tímico após depleção de timócitos e leucócitos e criopreservado por um ano, demonstrando a capacidade destes fragmentos para realizar a maturação dos linfócitos T. Esses dados, abrem a possibilidade para armazenar fragmentos tímicos prontos para o transplante imediato em pacientes com síndrome de DiGeorge ou fenótipo atípico (Omenn-like)DiGeorge syndrome is a disorder caused by a microdeletion on the long arm of chromosome 22q11.2. Approximately 1% of patients diagnosed with DiGeorge syndrome may have an absence of a functional thymus, which characterizes the complete form of the syndrome. These patients require urgent treatment to reconstitute T cell immunity. Thymus transplantation is a promising investigational procedure for reconstitution of thymic function in infants with congenital athymia. Here, we demonstrate a possible optimization of the preparation of thymus slices for transplantation through prior depletion of thymocytes and leukocyte cell lineages followed by cryopreservation with cryoprotective media (5% Dextran FP 40, 5% Me2SO, and 5% FBS) while preserving tissue architecture. Thymus fragments were stored in liquid nitrogen at -196 °C for 30 days or one year. The tissue architecture of the fragments was preserved, including the distinction between medullary TECs, cortical TECs, Hassall bodies. Moreover, depleted thymus fragments cryopreserved for one year were recolonized by intrathymic injections of 3×106 thymocytes per mL, demonstrating the capability of these fragments to support T-cell development. Thus, this technique opens up the possibility of freezing and storing large volumes of thymus tissue for immediate transplantation into patients with DiGeorge syndrome or atypical (Omenn-like) phenotypeBiblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPNovak, Estela MariaDias, Alana dos Santos2022-12-13info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5141/tde-14042023-164226/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2023-05-05T17:47:01Zoai:teses.usp.br:tde-14042023-164226Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212023-05-05T17:47:01Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false
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