Espectrometria de massas LCMS/MS na quantificação da prostaglandina em amostras de saliva aprimoramento e validação do método
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2023 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP |
Texto Completo: | https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25149/tde-29092023-150917/ |
Resumo: | Os anti-inflamatórios não esteroidais são fármacos que exercem seu mecanismo de ação por meio da inibição da ação da enzima ciclooxigenase, que sintetiza mediadores inflamatórios, como a prostaglandina 2, para combater os sintomas de dor, febre e inflamação. Desta forma, a quantificação das concentrações de prostaglandinas representa um reflexo da atividade inflamatória e da ação da ciclooxigenase nos tecidos humanos. No entanto, não existem na literatura muitos estudos que relatam a quantificação da prostaglandina, especialmente em amostras de saliva um fluido biológico de fácil obtenção, que favorece a avaliação de moléculas como esta, por ser menos invasivas para o paciente, uma vez que para esses estudos são necessárias muitas amostras. Desta forma, este trabalho tem como objetivo avaliar a eficácia do método MEPS LCMS/MS na extração e detecção de PGE2 a partir de amostras de saliva humana e validar essa metodologia a partir de amostras de saliva de acordo com as normas da ANVISA. Para tal, foram coletadas amostras de saliva, antes e após a ingestão do AINE meloxicam, utilizado como ferramenta farmacológica AINES. Estas amostras de saliva foram submetidas à extração da prostaglandina pelo método de microextração por sorvente empacotado (MEPS), por ser mais rápido e fácil de conduzir. Já para a determinação da concentração da prostaglandina presente nas amostras de saliva foi utilizada a cromatografia líquida acoplada ao espectrômetro de massas (LC MS/MS). Notou-se a diminuição dos níveis de prostaglandina E2 após a ingestão do medicamento, esses níveis começam a diminuir até 5 horas, voltando ao normal nas horas seguintes. Nos testes de validação foi possível confirmar a linearidade das amostras, obtendo um coeficiente de correlação de r2= 0,9888791 e a equação linear obtida foi de (x)= 540,783*x+447,083 e nos testes de precisão e exatidão o resultado foi inferior a 15%. Desta forma, a metodologia de extração e quantificação de prostaglandinas a partir de saliva humana testadas, mostraram-se rápidas e eficazes, de acordo com os critérios da ANVISA e podem ser utilizadas com segurança para tal finalidade. |
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Espectrometria de massas LCMS/MS na quantificação da prostaglandina em amostras de saliva aprimoramento e validação do métodoLCMS/MS mass spectrometry in the quantification of prostaglandin in saliva samples method improvement and validationLCMS/MSLCMS/MSprostaglandinprostaglandinasalivasalivaOs anti-inflamatórios não esteroidais são fármacos que exercem seu mecanismo de ação por meio da inibição da ação da enzima ciclooxigenase, que sintetiza mediadores inflamatórios, como a prostaglandina 2, para combater os sintomas de dor, febre e inflamação. Desta forma, a quantificação das concentrações de prostaglandinas representa um reflexo da atividade inflamatória e da ação da ciclooxigenase nos tecidos humanos. No entanto, não existem na literatura muitos estudos que relatam a quantificação da prostaglandina, especialmente em amostras de saliva um fluido biológico de fácil obtenção, que favorece a avaliação de moléculas como esta, por ser menos invasivas para o paciente, uma vez que para esses estudos são necessárias muitas amostras. Desta forma, este trabalho tem como objetivo avaliar a eficácia do método MEPS LCMS/MS na extração e detecção de PGE2 a partir de amostras de saliva humana e validar essa metodologia a partir de amostras de saliva de acordo com as normas da ANVISA. Para tal, foram coletadas amostras de saliva, antes e após a ingestão do AINE meloxicam, utilizado como ferramenta farmacológica AINES. Estas amostras de saliva foram submetidas à extração da prostaglandina pelo método de microextração por sorvente empacotado (MEPS), por ser mais rápido e fácil de conduzir. Já para a determinação da concentração da prostaglandina presente nas amostras de saliva foi utilizada a cromatografia líquida acoplada ao espectrômetro de massas (LC MS/MS). Notou-se a diminuição dos níveis de prostaglandina E2 após a ingestão do medicamento, esses níveis começam a diminuir até 5 horas, voltando ao normal nas horas seguintes. Nos testes de validação foi possível confirmar a linearidade das amostras, obtendo um coeficiente de correlação de r2= 0,9888791 e a equação linear obtida foi de (x)= 540,783*x+447,083 e nos testes de precisão e exatidão o resultado foi inferior a 15%. Desta forma, a metodologia de extração e quantificação de prostaglandinas a partir de saliva humana testadas, mostraram-se rápidas e eficazes, de acordo com os critérios da ANVISA e podem ser utilizadas com segurança para tal finalidade.Non-steroidal anti-inflammatory drugs are drugs that exercise their mechanism of action by inhibiting the action of the cyclooxygenase enzyme, which synthesizes inflammatory mediators, such as prostaglandin 2, , to combat symptoms of pain, fever and inflammation. Thus, the quantification of prostaglandin concentrations represents a reflection of the inflammatory activity and the action of cyclooxygenase in human tissues. However, there are not many studies in the literature that report the quantification of prostaglandin, especially in saliva samples - a biological fluid that is easy to obtain, which favors the evaluation of molecules like this one, as it is less invasive for the patient, since for these studies require many samples. Thus, this work aims to evaluate the effectiveness of the MEPS LCMS/MS method in the extraction and detection of PGE2 from human saliva samples and to validate this methodology from saliva samples in accordance with ANVISA standards. . To this end, saliva samples were collected before and after the ingestion of the NSAID meloxicam, used as a pharmacological tool NSAIDs. These saliva samples were subjected to prostaglandin extraction using the packaged sorbent microextraction (MEPS) method, as it is faster and easier to conduct. For the determination of the concentration of prostaglandin present in the saliva samples, liquid chromatography coupled to the mass spectrometer (LC MS/MS) was used. A decrease in prostaglandin E2 levels was noted after ingestion of the drug, these levels begin to decrease up to 5 hours, returning to normal in the following hours. In the validation tests it was possible to confirm the linearity of the samples, obtaining a correlation coefficient of r2= 0.9888791 and the linear equation obtained was (x)= 540.783*x+447.083 and in the precision and accuracy tests the result was lower to 15%. Thus, the methodology for extracting and quantifying prostaglandins from human saliva tested proved to be fast and effective, according to ANVISA criteria and can be safely used for this purpose.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPIshikiriama, Bella Luna ColombiniFerrari, Letícia Alves de Lima2023-07-20info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25149/tde-29092023-150917/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2024-08-02T13:53:02Zoai:teses.usp.br:tde-29092023-150917Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212024-08-02T13:53:02Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false |
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