Avaliação dos anticorpos monoclonais anti-CD3, anti-CD4 e anti-CD8 em um teste de imunofenotipagem para a quantificação de linfócitos T, utilizando a citometria de fluxo

• Autor(a) principal: Silva, Roberto Calado da
• Data de Publicação: 2009
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/25109
• topic: Síndrome da Imunodeficiência Adquirida; Imunofenotipagem; Anticorpos Monoclonais; Corantes Fluorescentes; Citometria de Fluxo

A Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS), causada pelo Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV), é uma doença crônica sexualmente transmissível que se propaga na espécie humana. Segundo a Organização Mundial da Saúde, em 2008, cerca de 33,2 milhões de pessoas estavam infectadas pelo vírus HIV em todo o mundo e só no Brasil, atualmente, são cerca de 630 mil infectados pelo referido vírus. O principal impacto da infecção pelo HIV no sistema imune é a destruição dos linfócitos T CD4, alvo principal do vírus. Com a introdução da terapia antirretroviral, tornou-se necessário o monitoramento da resposta imunológica dos pacientes HIV+ em tratamento e assim, em 1997, foi criada a Rede Nacional de Laboratórios para a contagem das células CD4+/CD8+. Posteriormente, o Ministério da Saúde demandou para Biomanguinhos o desenvolvimento de um kit alternativo ao existente no mercado atual para a quantificação dos linfócitos T CD4+. Neste contexto, foi necessária a identificação de possíveis fornecedores para os anticorpos monoclonais a partir da produção do fluido ascítico. O objetivo do nosso trabalho foi, inicialmente, concentrar as preparações dos anticorpos monoclonais recebidos e, em seguida, analisar a homogeneidade das mesmas, conjugando-as aos fluorocromos FITC, PE, Cy5 e PECy7 A homogeneidade dos anticorpos monoclonais foi avaliada por eletroforese em gel de poliacrilamida em condições desnaturantes (SDS-PAGE) na presença de agente redutor, e neste experimento, foram aplicadas quantidades diferentes dos anticorpos monoclonais no suporte eletroforético. Os resultados obtidos foram concordantes e só mostraram bandas relacionadas às proteínas investigadas. Após a etapa de conjugação foram calculadas as razões molares (fluorocromo / anticorpo monoclonal) que mostraram valores adequados dentro da faixa indicativa da eficiência reacional. Para a análise citofluorimétrica foi necessário, primeiramente, se ajustar alguns parâmetros tais como volume e diluição apropriados dos anticorpos monoclonais conjugados e para este fim, analisou-se os perfis obtidos em cada tempo para as células negativas e positivas relacionadas à janela (gate) dos linfócitos. Os resultados auferidos no estudo comparativo entre os imunoconjugados fluorescentes sintetizados no Laboratório de Tecnologia Diagnóstica (LATED) de Biomanguinhos e o conjugado Tritest da empresa Becton e Dickinson (BD) deram margem à conclusão que os conjugados produzidos na Instituição nacional eram similares àqueles da empresa BD, indiferente às marcações feitas (simples, dupla e tripla) servindo como base para a análise estatística à correlação linear de Pearson.