Detecção de organismos geneticamente modificados em alimentos: triagem por qPCR SYBR® Green

• Main Author: Sarmento, Sylvia Kahwage
• Publication Date: 2017
• Format: Bachelor thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Download full: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/35700
• topic: OGM; LOD; qPCR SYBR® Green; Método de Triagem; Controle de Qualidade; GMO; LOD; qPCR SYBR® Green; Screening Method; Quality Control; Alimentos Geneticamente Modificados; Estudos de Validação; Limite de Detecção; Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real; Controle de Qualidade

O crescimento constante da área mundial de cultivo de plantas geneticamente modificadas, em especial o Brasil, e o surgimento de novos eventos transgênicos têm trazido preocupações tendo em vista o aumento no número de produtos alimentícios contendo organismos geneticamente modificados (OGM) sendo comercializados, existindo ainda incertezas de como devem ser regulamentados esses produtos. Legislações e diretrizes vêm sendo criadas a fim de proteger o meio ambiente e a saúde humana como o Protocolo de Cartagena, as especificações do Codex Alimentarius para rotulagem de alimentos e de metodologias analíticas, e a Lei de Biossegurança, que regulamenta a pesquisa e o uso comercial dos OGM. Muitos países adotam políticas de rotulagem de produtos alimentícios com estabelecimento de limites da presença intencional de organismos geneticamente modificados. No Brasil, foi criado o Decreto n° 4.680/2003 em que é obrigatória a rotulagem de alimentos com mais de 1% de OGM. Laboratórios estão estudando e validando métodos para detecção e quantificação de genes modificados, que têm sido de grande importância no comércio brasileiro e internacional, especialmente em países que permitem tanto a rotulagem para a presença como para a ausência de transgênicos, com a finalidade de garantir a informação correta nas embalagens para os consumidores. A tradicional estratégia de análise de OGM em alimentos consiste na detecção de dois elementos genéticos comumente utilizados nas construções (P-35S e T-nos) seguida da quantificação evento-específica. No entanto, esta estratégia encontra cada vez mais limitações pela diversidade das novas construções e complexidade dos eventos que vêm sendo desenvolvidos e comercializados. Este trabalho se propôs a implementar a detecção de 5 elementos genéticos (P-35S, T-nos, CTP-2, PAT, BAR) utilizados nas construções dos OGM presentes em alimentos de soja e milho pelo método de triagem por qPCR SYBR® Green, além de estabelecer os limites de detecção (LOD) de cada alvo. Os resultados mostraram que a qPCR SYBR® Green é uma técnica robusta e sensível na amplificação das matrizes de alimentos de soja e milho, estabelecendo limites de detecção com valores abaixo do limite de 1% descrito no Decreto n° 4.680/2003. O método de triagem empregado foi bastante viável na discriminação dos eventos de soja geneticamente modificada presentes nas amostras analisadas, enquanto que a discriminação dos eventos de milho geneticamente modificado foi menor, uma vez que foram encontrados vários possíveis eventos de milho, havendo a necessidade da inclusão de mais um elemento genético na matriz de triagem.