Estudo da região promotora do gene PHEX humano: um gene com expressão alterada na infecção pelo Mycobacterium leprae

• Main Author: Santos, Sabrina da Silva
• Publication Date: 2006
• Format: Master thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Download full: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/35791
• topic: Mycobacterium leprae; Hanseníase; PHEX; Caracterização de promotores; Regiões Promotoras Genéticas; Endopeptidase Neutra Reguladora de Fosfato PHEX

A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae. Apesar do número de casos registrados de hanseníase no mundo ter reduzido desde 1985, o Brasil é atualmente o quinto pais em prevalecência de hanseníase no mundo, apresentando uma incidência de mais de 49 mil novos casos a cada ano. Os danos aos nervos periféricos constituem a principal conseqüência da infecção pelo M. leprae, resultando na perda da capacidade sensorial e motora dos mesmos. Entretanto, outro aspecto patológico importante da hanseníase são as alterações na estrutura óssea que contribuem para agravar as deformidades físicas características da doença. Estudos recentes sobre a interação entre o M. leprae e as células humanas revelam que o M. leprae regula negativamente a expressão do gene PHEX, uma endopeptidase de membrana plasmática relacionada ao metabolismo de fosfato e que participa do processo de mineralização da matriz óssea. Essa modulação da expressão do gene PHEX pelo M. leprae aponta a proteína PHEX como um possível agente molecular nas osteopatias hansenianas. Os mecanismos utilizados pelo M leprae para a inibição da expressão de PHEX ainda não são conhecidos e para a determinação dos mesmos é importante se estudar a regulação da expressão do gene PHEX. Estes estudos tornam-se complicados, pois a região promotora do gene PHEX humano ainda não foi caracterizada experimentalmente. Assim, o objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar a região promotora do gene PHEX humano. Através da análise por bioinformática de uma seqüência de 4498 bp localizada à frente do início da fase de leitura aberta do gene PHEX humano, identificou-se uma região de 1046 nucleotídeos com grandes possibilidades de corresponder à região promotora deste gene Esta região, bem como um fragmento contendo metade da provável região promotora (546 bp), foram obtidas através de PCR, utilizando iniciadores específicos. Posteriormente partiu-se para a clonagem destes fragmentos para que a potencial função reguladora destas regiões fosse analisada por ensaios de \201Cgene repórter\201D (luciferase). Assim, o fragmento de 546 bp foi clonado no vetor pGL3-Basic (clone-500) e a clonagem do fragmento de 1046 bp está em andamento. Tanto em osteoblastos quanto em células de Schwann o clone -500 não foi capaz de gerar luminosidade, mostrando que a porção de 546 bp do provável promotor não é suficiente para a indução da expressão do gente PHEX humano. A comparação deste resultado com os obtidos com o promotor murino, aonde foi possível identificar a expressão da luciferase mesmo em contructos muito menores do que o nosso clone -500, sugere que a porção mínima necessária para a indução da expressão fé PHEX in vivo varia consideravelmente entre seres humanos e camundongos.