Determinação dos níveis de dextrometorfano e dextrorfano em saliva humana para avaliação fenotípica de CYP2D6

• Autor(a) principal: Seba, Karine Souza
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/25750
• topic: Dextrometorfano; Fenotipagem de CYP2D6; Fármaco-sonda; CL-EM/EM; Dextromethorphan; CYP2D6 phenotyping; Probe Drug; LC-MS/MS; Dextrometorfano; Dextrorfano; Citocromo P-450 CYP2D6; Preparações Farmacêuticas; Stents

A CYP2D6 é uma enzima metabólica e sua atividade varia entre indivíduos em função de fatores genéticos, ambientais, presença de doenças e/ou comedicações. A fenotipagem de CYP2D6 com dextrometorfano (DXM) é uma abordagem útil para a determinação da atividade metabólica individual de CYP2D6 e seu procedimento envolve o uso de um método analítico adequado. O uso de matrizes alternativas como a saliva pode tornar a fenotipagem mais simples, e favorecer sua aplicação na rotina clínica. O objetivo desse estudo foi desenvolver e validar um método analítico em CL-EM/EM para a quantificação de DXM e dextrorfano (DTF) em saliva humana. Foi necessária uma alíquota de 200 µl de amostras de saliva, processadas utilizando-se a precipitação de proteínas com metanol. O método utilizou uma coluna Zorbax Eclipse fenil XDB (150 x 4,6 mm; 5 µm) e fase móvel constituída de tampão formiato de amônio 10 mM e acetonitrila, ambos acididificados com 0,1% de ácido fórmico, nas proporções de 65:35 (v:v) e fluxo de 1 ml/min. Os compostos foram eluídos em sistema de eluição isocrático, com tempos de retenção de 2,6 min (DTF) , 3,6 min (padrão interno) e 5 min (DXM). O método mostrou ser preciso (CV% ≤ 7,5), exato (EPR%: -13,6 a +8,8), e linear (r≥ 0,997) nas faixas de concentração de 1-100 ng/ml para DTF e de 5-1000 ng/ml para DXM. Adicionalmente, nenhum efeito matriz (CV% ≤ 11,8) ou questões relacionadas à estabilidade dos compostos foram observados para todas as condições testadas. A aplicação do método foi demonstrada através da determinação de DTF e DXM em 53 amostras de saliva de mulheres com câncer de mama em tratamento com tamoxifeno. Foi administrada uma dose de 30 mg de DXM e amostras de saliva foram coletadas 4 h após a dose. As concentrações salivares variaram de 12,3 a 3232 ng/ml para o DXM e de < 1 a 19,9 ng/ml para o DTF. Os valores de razão metabólica (RM DXM/DTF) foram calculados individualmente para a classificação fenotípica e variaram de 4 a 383, sendo todas as pacientes classificadas como metabolizadoras extensivas. O presente método é adequado para a quantificação de DTF e DXM em saliva e pode ser aplicado na rotina clínica para a fenotipagem de CYP2D6.