O impacto de cepas de Leishmania braziliensis isoladas de hospedeiros com diferentes formas clínicas na interação com macrófagos murinos
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Data de Publicação: | 2018 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) |
Texto Completo: | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/34582 |
Resumo: | Leishmania (Viannia) braziliensis é o agente etiológico da leishmaniose tegumentar americana (LTA) podendo causar diferentes formas clínicas: leishmaniose cutânea (CL), muco-cutânea (LMC) e lesões atípicas (LAT). Estas últimas podem apresentar-se como pápulas, placas, nódulos verrucosos, lesões vegetativas e/ou lupóides. Nossa hipótese de trabalho seria quais os fatores responsáveis por estas diferentes manifestações clínicas dentro desta espécie. Foram avaliados diferentes parâmetros relacionados à infectividade do parasito: 1) papel do lipofosfoglicano (LPG) na interação com macrófagos peritoneais; 2) avaliação dos parasitos na biogênese de fagossomos em macrófagos medulares (BMMs); 3) avaliação e quantificação da expressão de LPG e GP63 na superfície dos parasitos e, 4) caracterização preliminar de LPGs purificados destes parasitos. Utilizamos seis cepas/isolados de L. braziliensis: M2903, RR051 e RR418 (lesões típicas), RR410 (atípica), M15991 (muco-cutânea) e M8401 (cepa isolada de vetor). LPGs das diferentes cepas/isolados de L. braziliensis foram extraídos e purificados. Macrofágos peritoneais de camundongos 57BL/6 e respectivos knock-outs (TLR2 -/- e TLR4 -/-) foram estimulados por estes LPGs para a produção de óxido nítrico (NO) e citocinas. Os LPGs, dependendo da forma clínica da cepa de que foram purificados, ativaram diferencialmente a produção de NO e citocinas (TNF-α, IL-6, IL-12) via LR4. Não houve produção de IL-1β. Νο próximo passo, incubamos os mesmos LPGs em presença de zimozan. Os LPGs aderidos ao zimozam foram incubados com BMMs para a avaliação do marcador de biogênese LAMP1 (recrutamento e fagocitose). Não foi observada diferenças na biogênese de fagossomos de BMMs incubados com zimozan e LPGs das diferentes cepas/isolados. Posteriormente, os parasitos foram opsonizados e incubados em presença dos BMMs para a avaliação infecção. A cepa RR410 (atípica) apresentou um índice de infectividade menor quando comparada às outras cepas. Estes mesmos experimentos foram realizados na presença de LAMP1 e Lysotracker (fagocitose e acidificação). Os parasitos induziram diferenças na biogênese de fagossomos dependendo da cepa/isolado. Por exemplo, a cepa atípica (RR410) foi menos fagocitada que as outras, enquanto a cepa M15991 (muco-cutânea) acidificou menos o fagolissomo. Para a avaliação da expressão de LPG e GP63, foi observado em comparação aos controles (Leishmania donovani e Leishmania major) que ambos glicoconjugados estavam menos expressos na superfície de L. braziliensis. Nossos resultados demostraram que diferentes isolados de L. braziliensis de diferentes formas clínicas e hospedeiros podem induzir diferentes respostas em células do hospedeiro vertebrado. Este efeito se deu principalmente, na fagocitose, produção de NO e citocinas, desfechos na biogênese dos fagossomos e expressão de glicoconjugados (LPG e GP63). A caracterização preliminar das unidades repetitivas do LPG detectou polimorfismos que podem justificar os diferentes padrões de ativação em macrófagos peritoneais e de infecção com os parasitos inteiros. |
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Vieira, Tamara da SilvaGontijo, Célia Maria FerreiraSoares, Rodrigo Pedro PintoGontijo, Célia Maria FerreiraFonseca, Cristiana ToscanoAfonso, Luis Carlos CroccoSoares, Rodrigo Pedro Pinto2019-08-02T13:30:38Z2019-08-02T13:30:38Z2018VIEIRA, Tamara da Silva. O impacto de cepas de Leishmania braziliensis isoladas de hospedeiros com diferentes formas clínicas na interação com macrófagos murinos. 2018. 67 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde)-Instituto René Rachou, Fundação Oswaldo Cruz, Belo Horizonte, 2018.https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/34582Leishmania (Viannia) braziliensis é o agente etiológico da leishmaniose tegumentar americana (LTA) podendo causar diferentes formas clínicas: leishmaniose cutânea (CL), muco-cutânea (LMC) e lesões atípicas (LAT). Estas últimas podem apresentar-se como pápulas, placas, nódulos verrucosos, lesões vegetativas e/ou lupóides. Nossa hipótese de trabalho seria quais os fatores responsáveis por estas diferentes manifestações clínicas dentro desta espécie. Foram avaliados diferentes parâmetros relacionados à infectividade do parasito: 1) papel do lipofosfoglicano (LPG) na interação com macrófagos peritoneais; 2) avaliação dos parasitos na biogênese de fagossomos em macrófagos medulares (BMMs); 3) avaliação e quantificação da expressão de LPG e GP63 na superfície dos parasitos e, 4) caracterização preliminar de LPGs purificados destes parasitos. Utilizamos seis cepas/isolados de L. braziliensis: M2903, RR051 e RR418 (lesões típicas), RR410 (atípica), M15991 (muco-cutânea) e M8401 (cepa isolada de vetor). LPGs das diferentes cepas/isolados de L. braziliensis foram extraídos e purificados. Macrofágos peritoneais de camundongos 57BL/6 e respectivos knock-outs (TLR2 -/- e TLR4 -/-) foram estimulados por estes LPGs para a produção de óxido nítrico (NO) e citocinas. 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A caracterização preliminar das unidades repetitivas do LPG detectou polimorfismos que podem justificar os diferentes padrões de ativação em macrófagos peritoneais e de infecção com os parasitos inteiros.Leishmania (Viannia) braziliensis is the etiologic agent of American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) displaying different clinical forms: cutaneous leishmaniasis (CL), mucocutaneous (MCL) and atypical lesions (LAT). LAT may be presented as papules, plaques, verrucous nodules, vegetative and/or lupoid lesions. In our hypothesis we are testing the possible factors responsible for those different clinical manifestations within this species. Different parameters related to infectivity of the parasite were evaluated: 1) role of lipophosphoglycan (LPG) in the interaction with peritoneal macrophages; 2) evaluation of parasites in the biogenesis of phagosomes in medullary macrophages (BMMs); 3) evaluation and quantification of LPG and GP63 expression on the surface of the parasites and, 4) preliminary characterization of purified LPGs of these parasites. We used six isolates of L. braziliensis: M2903, RR051 and RR418 (typical lesions), RR410 (atypical), M15991 (mucocutaneous) and M8401 (isolated vector strain). LPGs from the different isolates of L. braziliensis were extracted and purified. Peritoneal macrophages of C57BL/6 mice and their knock outs (TLR2 -/- and TLR4 -/-) were stimulated by these LPGs for the production of nitric oxide (NO) and cytokines. LPGs, depending on the clinical form of the strain from which they were purified, differentially activated the production of NO and cytokines (TNF-α, IL-6, IL-12) via TLR4. There was no production of IL-1β next step, we incubated the same LPGs in the presence of zymosan. LPGs adhered to zymosan were incubated with BMMs for evaluation of the LAMP1 biogenesis marker recruitment and phagocytosis). No differences were observed in phagosome biogenesis of BMMs incubated with zymozan and LPGs of the different strains/isolates. Subsequently, the parasites were opsonized and incubated in the presence of BMMs for infection evaluation. The RR410 (atypical) strain had a lower infectivity index when compared to the other strains. These same experiments were performed in the presence of LAMP1 and Lysotracker (phagocytosis and acidification). The parasites induced differences in the biogenesis of phagosomes depending on the train/isolate. For example, the atypical strain (RR410) was less phagocytosed than the others, whereas strain M15991 (muco-cutaneous) less acidified the phagolis some. For the evaluation of LPG and GP63 expression, it was observed in comparison to controls (Leishmania donovani and Leishmania major) that both glycoconjugates were less expressed on the surface of L. braziliensis. Our results demonstrated that different isolates of L. braziliensis from different clinical and host forms can induce different responses in cells of the vertebrate host. This effect was mainly due to phagocytosis, NO and cytokine production, phagosome biogenesis and glycoconjugate expression (LPG and GP63). The preliminary characterization of LPG repetitive units detected polymorphisms that may justify different patterns of activation in peritoneal macrophages and infection with whole parasites.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.porLeishmania (Viannia) braziliensisInteração parasito-hospedeiroLipofosfoglicanoGP63BiogêneseLeishmania (Viannia) braziliensisHost-parasite interactionLipophosphoglycanGP63BiogenesLeishmania braziliensis/ParasitologiaLeishmania braziliensis/Isolamento e purificaçãoBiogêneseO impacto de cepas de Leishmania braziliensis isoladas de hospedeiros com diferentes formas clínicas na interação com macrófagos murinosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis2018Fundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Belo Horizonte, MG, BrasilUniversidade Federal de Minas Gerais. Belo Horizonte, MG, BrasilMestrado AcadêmicoBelo Horizonte/MGFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Programa de Pós Graduação em Ciências da Saúdeinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-83082https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/34582/1/license.txt9193a7c197bc67acd023525e72a03240MD51ORIGINALD_2018_TamaraVieira.pdfD_2018_TamaraVieira.pdfapplication/pdf14017117https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/34582/2/D_2018_TamaraVieira.pdfb4a4c0ef60f1d4fe9eddd762fa7d82d8MD52TEXTD_2018_TamaraVieira.pdf.txtD_2018_TamaraVieira.pdf.txtExtracted texttext/plain59156https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/34582/3/D_2018_TamaraVieira.pdf.txtc220ac43d6e19b358c1ca658c314df92MD53icict/345822019-09-09 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VIEIRA, Tamara da Silva. O impacto de cepas de Leishmania braziliensis isoladas de hospedeiros com diferentes formas clínicas na interação com macrófagos murinos. 2018. 67 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde)-Instituto René Rachou, Fundação Oswaldo Cruz, Belo Horizonte, 2018. |
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