Proteínas recombinantes quiméricas do Trypanosoma cruzi como ferramenta diagnóstica para identificar a doença de Chagas crônica através do Western blot

• Autor(a) principal: Daltro, Ramona Tavares
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/51229
• topic: Doença de Chagas Crônica; Trypanosoma Cruzi; Imunodiagnóstico; Western Blot

INTRODUÇÃO: A doença de Chagas (DC) é causada pelo Trypanosoma cruzi. Sua forma de infecção pode ser vetorial, oral ou congênita, além da transfusão sanguínea. No Brasil, o número de indivíduos infectados varia de 1,9 a 4,6 milhões e, na América Latina, de 5 a 7 milhões. A fase crônica da doença é caracterizada pela presença de anticorpos IgG anti-T. cruzi e o seu diagnóstico é realizado por métodos sorológicos, principalmente o ELISA indireto. A OMS preconiza a utilização de dois testes distintos para o diagnóstico da DC e a combinação dos resultados define os indivíduos como positivos, negativos ou, no caso de discordância entre eles, inconclusivos. Neste último caso, um teste confirmatório deve ser empregado, como o Western blot (WB) ou a PCR; no entanto, esta última apresenta baixa sensibilidade na fase crônica da doença. Quatro antígenos recombinantes quiméricos, denominados IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4 foram expressos pelo nosso grupo e avaliados em estudos de fase I, II e III, utilizando o ELISA, o microarranjo líquido e a imunocromatografia, obtendo acurácia de 95 a 100%. Estes antígenos também foram submetidos à avaliação para detecção da DC em cães. Em 2016, o único teste de Western blot produzido no Brasil foi descontinuado e, por conta disso e devido ao elevado desempenho diagnóstico conferido aos antígenos IBMP, investigamos a utilização destas moléculas em diagnosticar a DC utilizando ensaios de WB. OBJETIVO: Avaliar e validar o desempenho diagnóstico dos antígenos recombinantes quiméricos do T. cruzi (IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4) como matrizes antigênicas utilizando plataforma de WB no diagnóstico da DC crônica. MATERIAL E MÉTODOS: Foram avaliadas 22 amostras positivas, 24 negativas e 3 positivas para leishmaniose visceral. A padronização dos ensaios foi realizada através de diferentes diluições dos antígenos, dos anticorpos conjugados e das amostras séricas. A validação do potencial diagnóstico foi realizada através de curvas ROC. A reatividade cruzada também foi avaliada para leishmaniose visceral. RESULTADOS: Todos os antígenos IBMP apresentaram 100% de sensibilidade, especificidade e acurácia, com exceção do antígeno IBMP-8.3, que obteve 90,9% de sensibilidade, 100% de especificidade e 95,7% de acurácia. Todavia, não houve diferença significativa nos referidos valores. CONCLUSÕES: No presente estudo (fase I ou prova de conceito), os antígenos IBMP apresentaram elevada capacidade em diferenciar amostras positivas das negativas para a DC, sendo, portanto, elegíveis para o estudo de fase II.