Perfil proteico-imunogênico de proteínas detentoras de alto valor diagnóstico de lentivírus de pequenos ruminantes.

• Autor(a) principal: AZEVEDO, D. A. A. de
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da EMBRAPA (Repository Open Access to Scientific Information from EMBRAPA - Alice)
• Texto Completo: http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/handle/doc/1032426
• topic: CAEV; Proteômica; Análise proteônica sorológica; SERPA; LVPR; Espectrometria de massa; Artrite encefalite caprina; Lentivirose; Immunodiagnosis; Serological diagnosis; Caprine arthritis encephalit virus; Caprino; Ovino; Doença animal; Biotecnologia; Espectrometria; Visna maedi virus; Mass spectrometry; Goats; Sheep; Animal diseases; Lentivirus

Os lentivírus de pequenos ruminantes, vírus da artrite encefalite caprina e vírus maedi visna, pertencem a família Retroviridae. São relacionados genética e antigenicamente, causam doenças crônicas e progressivas, levando a perdas produtivas e econômicas. A transmissão interespécie desses vírus pode ser preocupante devido a recombinação genética desses lentívirus. O estudo da proteômica desses vírus torna-se necessário para o conhecimento da função dos genes. A análise proteômica sorológica (SERPA) associada a espectrometria de massas (EM), dentre muitas possibilidades, permite o conhecimento de proteínas de valor diagnóstico. Com isso objetivou-se delinear o perfil proteíco-imunogênico bidimensional de lentivírus de pequenos ruminantes caracterizando proteínas detentoras de alto valor diagnóstico do antígeno dos lentivírus de pequenos ruminantes. Primeiramente realizou-se explant de células de membrana sinovial caprina e posteriormente, com o subcultivo das células, a produção do antígeno de três cepas virais MVV K1514, CAEV Cork e LVC-CE. Essas amostras foram submetidas à eletroforese bidimensional e western blot. Proteínas imunorreativas foram escolhidas para o sequenciamento através de espectrometria de massas. Como o resultado elaborou-se o perfil proteíco-imunogênico bidimensional das cepas de LVPR, inclusive da cepa viral do estado do Ceará (LVC-CE), dados inéditos para o país. Seis proteínas tiveram sequencias homologas compatíveis com proteínas de CAEV e MVV, referentes às proteínas p28, p19 e p15. Demonstrou-se a similaridade da resposta imune entre as cepas estudadas. A técnica SERPA associada à EM permitiu a identificação e caracterização peptídica das proteínas imunogênicas das cepas padrão CAEV Cork e MVV K1514, e da amostra de LVPR nativa do estado do Ceará. Abstract: The small ruminant lentiviruses (SRLV), the caprine arthritis encephalitis virus and maedi visna virus belong to Retroviridae family. They are related genetically and antigenically, and induce chronic and progressive disease which leads to productive and economic losses. The interspecific transmission is worrying due to the genetic recombination of these viruses. The proteomic study is necessary in order to know the genes function. Serological proteome analysis (SERPA) in association with mass spectrometry, besides others possibilities, allow knowing high-value proteins for diagnosis. The aim of this study was to determine the two-dimensional proteinimmunogenic profile and characterize the high-value proteins for diagnostic of different strains of SRLV. Initially, goat synovial membrane cells were explanted and subculture for antigen production of three viral strains CAEV Cork, MVV K1514 and LVC-CE. These samples were submitted to two-dimensional electrophoresis and western blot. Immunoreactive proteins were chosen in order to be sequenced by mass spectrometry. The results showed two-dimensional protein-immunogenic profile of the SRLV strains. Six proteins had homologous sequences compatible to protein CAEV and MVV, related to protein p28 and p15. The SERPA in association with mass spectrometry allowed the immunogenic protein identification and peptide characterization of the two standard strains, CAEV Cork and MVV K1514, and also the national one isolated in Ceará state.