Ajustes no protocolo de DNA CTAB 2x para extração de DNA em diversas espécies vegetais.

• Autor(a) principal: LIMA, R. S. N.
• Data de Publicação: 2007
• Outros Autores: SANTOS, C. A. F., RODRIGUES, M. A., BATISTA, P. P.
• Tipo de documento: Capítulo de livro
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da EMBRAPA (Repository Open Access to Scientific Information from EMBRAPA - Alice)
• Texto Completo: http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/handle/doc/160442
• topic: Espécie vegetal; Protocolo; Melhoramento genético; DNA; Extração; Biologia Molecular; Melhoramento Genético Vegetal; Genetic improvement

Diversas técnicas de biologia molecular estão disponíveis para a detecção da variabilidade genética ao nível de seqüência de DNA. O objetivo do presente trabalho foi ajustar a técnica de extração de DNA a partir de diferentes concentrações de -mercaptoetanol, utilizando o protocolo CTAB 2X. DNA genômico total foi isolado de folhas verdes e sadias em espécies distintas como umbuzeiro, mangueira, cebola e goiabeira, segundo protocolo do CTAB 2X com algumas adaptações (500 mM Tris pH 8,0; 1,4 M NaCl; CTAB 0,2% (p/v); 2% -mercaptoetanol; 20 mM de EDTA). A concentração do mercaptoetanol utilizado foi de 2%, um aumento de 10X em relação ao protocolo padrão. A concentração e a integridade do DNA genômico foram observadas em géis 0.8% de agarose comum, comparado a um DNA lambda de 30, 50 e 100 ng/mL. As amostras extraídas com a concentração de 2% de -mercaptoetanol tiveram melhores resultados, comparando-se com a concentração de 0,2% estabelecida no protocolo CTAB. Este procedimento resultou em extração satisfatória para a maioria dos métodos de amplificação de DNA via PCR, nas distintas espécies estudadas.