Identificação de um potencial biomarcador de malária

• Autor(a) principal: CARDOSO, Raquel Marques
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/117055
• topic: Ciências biomédicas; Biologia molecular; Malária; P. falciparum; Biomarcadores; Proteómica; Nano LC-MS/MS; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

A malária é uma doença que afeta a população mundial há muitos anos, sendo estudada pela primeira vez em 1880. Esta doença é provocada por parasitas protozoários do género Plasmodium spp., dividindo-se em cinco espécies. Das cinco espécies destaca-se a espécie P. falciparum, à qual está associada a maior taxa de mortalidade. Os métodos de diagnóstico desta doença podem dividir-se em diretos e indiretos, no entanto os métodos diretos são os mais utilizados em campo. Um exemplo é o teste de diagnóstico rápido que permite a deteção de antigénios do parasita, com elevada sensibilidade e especificidade. Os biomarcadores possíveis de detetar neste tipo de testes apresentam algumas desvantagens, como não estarem presentes em determinadas estirpes de P. falciparum ou não serem utilizados em cargas parasitárias baixas, sendo necessária a pesquisa de novos biomarcadores para a produção de novos tipos de testes de diagnóstico rápido. O objetivo principal deste trabalho é a deteção de novos biomarcadores de malária, recorrendo a uma abordagem de proteómica. Foram analisadas amostras de um indivíduo infetado com P. falciparum, de um indivíduo saudável com historial clínico de malária e de um indivíduo saudável sem historial clínico de malária, bem como culturas de eritrócitos humanos infetadas com P. falciparum. O trabalho desenvolvido dividiu-se nas seguintes etapas sequenciais: depleção das proteínas mais abundantes para análise do perfil proteico de amostras de sangue, soro e plasma, e de culturas de eritrócitos humanos infetadas por P. falciparum; análise proteómica; excisão de spots de interesse para futura identificação de proteínas; análise das amostras de plasma por Nano LC-MS/MS e identificação das proteínas com alteração de expressão como potenciais biomarcadores de infeção por P. falciparum. No final deste trabalho foi possível identificar, por Nano LC-MS/MS, 14 proteínas que apresentavam alterações significativas na sua expressão. Estas 14 proteínas, todas de origem Homo sapiens, eram indicativas do combate da infeção por parte do hospedeiro, podendo ser consideradas possíveis biomarcadores. Foram igualmente identificados e excisados spots dos géis provenientes da eletroforese bidimensional, que poderão corresponder a proteínas de interesse. No entanto, não foram identificadas proteínas de origem P. falciparum, uma vez que estas proteínas podem encontrar-se em menor quantidade, não sendo detetadas nas técnicas utilizadas. Neste trabalho foram otimizados protocolos que permitem, futuramente, a análise de amostras de plasma através de técnicas de proteómica, nomeadamente a partir da eletroforese bidimensional.