Diversidade e estudo de plasmídeos em estirpes de Escherichia coli produtoras de ESBL isoladas de animais selvagens

• Autor(a) principal: Cristóvão, Filipe Antunes da Silva Arêde
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/8125
• topic: Animais selvagens; Escherichia coli; Plasmídeos

Os plasmídeos são elementos importantes na mobilidade dos genes de resistência aos antibióticos, como os que codificam beta-lactamases de largo espectro (ESBL), que são de elevada importância clínica. Isolados de E. coli produtoras de ESBL, estão altamente disseminados nos hospitais em todo o mundo e de forma semelhante e já foram detectados em animais selvagens no meio-ambiente. Isolados de E. coli positivos para a produção de ESBL das classes CTX-M, TEM e SHV (n=53) foram recuperados em amostras fecais de animais selvagens em estudos prévios, e o seu fenótipo e genótipo de resistência aos antibióticos foi também determinado previamente nesses estudos. O objectivo do presente estudo foi determinar a sua diversidade clonal através de electroforese em campo pulsado (PFGE) e verificar a transferência de determinantes de resistência entre as estirpes de E. coli produtoras de ESBL e uma estirpe receptora específica, através de conjugação, bem como determinar plasmídeos de resistência nos dadores e transconjugantes obtidos. Neste estudo foram incluídos cinquenta e três isolados de E. coli de diferentes origens: de lobo (n=14), dourada (n=10), lince ibérico (n=9), javali (n=8), aves de rapina (n=4), raposa (n=3), aves selvagens dos Açores (n=2), veado (n=2) e coruja (n=1), e contendo os genes blaCTX-M-14 (n=18), blaCTX-M-1 (n=12), blaTEM-52 (n=9), blaTEM-1 (n=15) e blaSHV-12 (n=17). As estirpes pertenciam aos grupos filogenéticos A (n=23), B1 (n=20) e D (n=10). Todos os isolados foram submetidos a electroforese em campo pulsado (PFGE) utilizando a enzima XbaI. A maioria apresentou padrões de PFGE diferentes, sendo possível detectar 44 padrões distintos. Vinte e nove isolados foram então seleccionadas com diferente padrão de PFGE, tipo de ESBL e com diferente origem e todas apresentando susceptibilidade à rifampicina. Desta selecção, os isolados pertencentes ao grupo filogenético D (n=8) foram submetidos a tipificação de sequências multilocus (MLST), e foram observados quarto STs distintos: ST69, ST115, ST117 e ST2001. A selecção de 29 isolados possuía os genes blaCTX-M-14 (10 isolados); blaCTX-M-1 (8 isolados); blaTEM-52 (5 isolados); blaTEM-1 (8 isolados); e blaSHV-12 (8 isolados). Vinte e um isolados transferiram os genes ESBL através de conjugação para a estirpe receptora E. coli CSH26 (lactose negative, resistente à rifampicina e sem plasmídeos). A análise dos plasmídeos foi realizada nos dadores e nas estirpes transconjugantes. Foram observados entre um e seis replicões distintos nos dadores, sendo os mais frequentes, IncK (17 isolados), IncI1 (14 isolados) and IncFIB (12 isolados). O replicão IncI1 foi identificado em 13 transconjugantes obtidos a partir de estirpes dadoras com os genes CTX-M-1, CTX-M-14, TEM-1, TEM-52 e SHV-12. Os genes ESBL são facilmente transferidos através de conjugação para outras estirpes de E. coli e é possível que os plasmídeos IncI1 tenham um papel importante no processo de transferência.