Detection of tumor-associated sialylated O-glycans by MALDI-TOF/TOF

• Autor(a) principal: Almeida,Andreia Filipa Ferreira de
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/10673
• topic: Bioquímica clínica; Glicosilação; Antigenes

Uma das alterações fenótipicas mais comuns nos tumores são modificações no padrão de O-glicosilação na superfície da célula e nas glicoproteínas secretadas. Como consequência têm implicações nas suas funções biológicas. Em particular, tem sido descrito que algumas células tumorais sobreexpressam ou expressam de novo antigénios associados ao antigénio Thomsen-Friedenreich (TF), ou seja, sialil-Tn, sialil-T e disialyl-T. Estes epítopos resultam da paragem prematura do processo de O-glicosilação em proteínas e têm um impacto direto sobre a biologia do tumor. Assim sendo, a identificação destas modificações póstranslacionais anormais em proteínas é essencial para determinar as relações estrutura-função e descobrir novos alvos terapêuticos. Além disso, as proteínas que transportam estas alterações podem ser secretadas na corrente sanguínea, urina, e em outros fluidos corporais e, portanto, são explorados como biomarcadores em testes não invasivos. Atualmente a detecção de antigénios associados ao antigénio TF é baseado em métodos imunohistoquímicos em que, embora úteis para uma investigação de rotina, não conseguem descrever totalmente o padrão de glicosilação de uma dada proteína. Sendo assim, neste trabalho apresentamos uma abordagem analítica para determinar estes glicanos em quantidades minimas de glicoproteínas (picomole) isoladas a partir de géis SDS-PAGE. Resumidamente, as glicoproteínas são de-Oglicosiladas no gel por beta-eliminação redutiva, permetiladas e analisadas por nanoLC-MALDI-TOF/TOF. De seguida, os dados provenientes são sujeitos a uma seleção melhorada dos sinais analíticos relevantes, utilizando ferramentas de bioinformática. Esta abordagem foi, em seguida, aplicada com sucesso na validação do western blotting quanto à expressão de sialil-Tn numa glicoproteína isolada a partir da urina de ratos com tumores na bexiga induzidos quimicamente e no plasminogénio isolado a partir do soro de pacientes com lesões precursoras do cancro gástrico.