Avaliação in vitro do potencial citotóxico da imunotoxina Moxetumomab pasudotox para o tratamento do linfoma canino

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Loureiro, Joana Teles
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.5/24464
Resumo: Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária. Área científica de Clínica
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Atualmente, as opções de tratamento disponíveis não permitem melhorar a perspetiva clínica dos pacientes, pelo que novas abordagens têm vindo a ser desenvolvidas em áreas como a imunoterapia. Aqui realçam-se as imunotoxinas que conjugam um anticorpo especificamente dirigido para a neoplasia com a elevada citotoxicidade de toxinas extremamente potentes. Neste âmbito, foi já aprovada uma imunotoxina anti-CD22, Moxetumomab pasudotox (Mp), para o tratamento de tricoleucemia em medicina humana. Por ser um fármaco aprovado, com elevado potencial e com resultados clínicos promissores, este estudo teve como objetivo avaliar o potencial desta molécula para aplicações em Medicina Veterinária, nomeadamente no tratamento de linfoma canino. Inicialmente, avaliou-se a expressão de CD22 na linha celular de linfoma B canino, CLBL-1, a qual foi confirmada, permitindo avançar com ensaios de citotoxicidade nestas células, expondo-as a Mp durante 72 horas. Como controlo, realizaram-se ensaios paralelos com linhas celulares de linfoma B e T de origem humana, assim como com uma segunda imunotoxina inespecífica, SS1P. Verificou-se que Mp tem efeito citotóxico dose-dependente em CLBL-1, resultante da sua ligação e internalização através do recetor CD22. Ademais, mesmo não sendo espécie-específico, Mp demonstrou, nesta linha celular, uma elevada potência, com um IC50 de 59,16 ng/mL (desvio-padrão ± 4,03 ng/mL). Por fim, com recurso a marcadores proteicos e através de citometria de fluxo e microscopia de fluorescência, comprovou-se o mecanismo de ação da imunotoxina em CLBL-1, a qual provoca inibição da síntese proteica, correlacionando-se com o seu efeito final na viabilidade celular. Os resultados obtidos demonstram que Mp, mesmo não sendo espécie-específico, tem atividade no cão, reconhecendo o CD22 por reação cruzada, e que tem elevado potencial para tratamento de linfoma canino, mostrando-se bastante promissor nos ensaios in vitro.ABSTRACT - In vitro evaluation of the cytotoxic potential of the immunotoxin Moxetumomab pasudotox for the treatment of canine lymphoma - Lymphoma is the most common hematopoietic neoplasia in dogs. It is a complex disease that includes different histological and immunophenotypic subtypes. Of these, B-cell lymphomas are the most common. In terms of biology, genetics, and pathology, it is very similar to human non-Hodgkin lymphoma (NHL), which makes the dog a good model for comparative studies and allows the knowledge exchange between species. The conventional therapeutic approach in canine lymphoma remains chemotherapy which results in frequent relapses and limited mean survival times, despite having high remission rates initially. Nowadays, the available treatment options do not allow to improve the clinical perspectives for patients, and for this reason, new approaches have been developed, such as immunotherapies. Among these, immunotoxins are a promising option as it combines the specificity of targeted antibodies with the high cytotoxicity of very potent toxins. In this field, an anti-CD22 immunotoxin, Moxetumomab pasudotox (Mp), has been approved for hairy cell leukaemia in human medicine, as it is a molecule with high treatment potential and promising clinical results. For these reasons, this study aimed to evaluate Mp's applicability in veterinary medicine, namely, its potential for the treatment of canine lymphoma. Initially, the expression of CD22 in a canine B-cell lymphoma cell line, CLBL-1, was evaluated. Once confirmed, cell viability assays were performed, exposing these cells to Mp for 72 hours. As controls, parallel assays were performed with human B and T-cell lymphoma cell lines, as well as with a non-specific immunotoxin, SS1P. The results demonstrated that Mp causes a dose-dependent cytotoxic effect on CLBL-1, which is a consequence of its binding and internalization through the CD22 receptor. Furthermore, even though it is not species specific, in this cell line Mp showed high potency, with an IC50 of 59,16 ng/ml (standard deviation ± 4,03 ng/ml). Finally, with protein markers and through flow cytometry and fluorescence microscopy, the immunotoxin's mechanism of action has been verified in CLBL 1 cells. It has been shown that the immunotoxin inhibits protein synthesis, which correlates with its final effect on cell viability. These assays demonstrate that, despite not being species-specific, Mp has activity in the dog, recognizing CD22 by cross-reaction. Furthermore, it has a high potential as a treatment for lymphoma in dogs since it has promising results in vitro.Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina VeterináriaSilva, Frederico Nuno Castanheira Aires daNeves, Solange Judite Roque Coelho Alves GilRepositório da Universidade de LisboaLoureiro, Joana Teles2023-05-05T00:30:28Z2022-05-052022-05-05T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10400.5/24464TID:203043626porLoureiro JT. 2022. Avaliação in vitro do potencial citotóxico da imunotoxina Moxetumomab pasudotox para o tratamento do linfoma canino [dissertação de mestrado]. Lisboa: FMV-Universidade de Lisboainfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-05-07T01:30:48ZPortal AgregadorONG
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