Caracterização de sistemas de bombas de efluxo de Aliarcobacter butzleri

• Autor(a) principal: Nunes, Ana Rita de Almeida
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.6/11487
• topic: Aliarcobacter Butzleri; Antibióticos; Resistência; Sistemas de Efluxo; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia::Biotecnologia

Aliarcobacter butzleri é um enteropatogéneo emergente reconhecido como a quarta espécie mais comum em amostras diarreicas entre os Campylobacter-like organisms, encontrando-se na lista de microrganismos considerados um perigo grave para a saúde humana, pela Comissão Internacional em Especificações Microbiológicas para Alimentos. Este organismo patogénico é conhecido por apresentar múltipla resistência a antibióticos, podendo assim originar um problema no tratamento de infeções causadas por esta bactéria. Informação prévia acerca desta bactéria sugere que a mesma contém diversos sistemas putativos de efluxo que permanecem por caracterizar, e que poderão ter um papel relevante como mecanismos de resistência a antimicrobianos. Assim, com este trabalho pretendeu-se estudar o papel de cinco sistemas de efluxo distintos, todos da família "Resistance nodulation cell division". Para tal, o estudo foi iniciado com construção de mutantes de A. butzleri, utilizando uma estirpe naturalmente transformável(AB28/11), através da interrupção dos genes codificantes da proteína de membrana interna responsável pelo reconhecimento do substrato. Dos cinco sistemas em estudo só foi possível gerar mutantes para três, onde se procedeu à interrupção dos genes areB, areE e areG, correspondentes às bombas de efluxo AreABC, AreDEF e AreGHI, respetivamente. A construção dos mutantes foi confirmada pela técnica de “Reverse Transcription-Polimerase Chain Reaction”. Posteriormente, foram realizados uma série de testes para comparação entre os mutantes e a estirpe parental. Quanto ao crescimento bacteriano não foram observadas diferenças significativas entre estirpes. De seguida, foi avaliada a contribuição de cada sistema de efluxo em estudo para a resistência a antibióticos, sais biliares e biocidas, pela determinação da concentração mínima inibitória pelo método de microdiluição. Os resultados mostram que: a inativação do gene areG teve um impacto na resistência a cinco das seis classes de antibióticos testadas, bem como na resistência a diversos biocidas; a inativação do gene areB teve um impacto na resistência às cefalosporinas, estreptomicina, fluoroquinolonas e macrólidos; o perfil fenotípico de resistência do mutante AB28/11?areE foi semelhante à estirpe parental. Para além disso, procedeu-se à avaliação do papel do sistema de efluxo na acumulação intracelular de compostos, usando um método de fluorescência, que avaliou a acumulação de brometo de etídio, nas estirpes parental e mutantes. Esta avaliação demonstrou que a bomba AreABC apresenta um papel importante na extrusão de compostos tóxicos, visto que se observou uma maior acumulação de brometo de etídio do que a observada para a estirpe parental, demonstrando uma menor atividade global dos sistemas de efluxo das células. Em suma, com este trabalho foi possível caraterizar o papel dos sistemas de efluxo AreABC, AreDEF e AreGHI na resistência de A. butzleri, tendo-se destacado o potencial papel dos sistemas AreABC e AreGHI para a multirresistência desta bactéria.