Avaliação da reação em cadeia da polimerase quantitativa na detecção de Mycobacterium leprae em casos de hanseníase de difícil diagnóstico

• Autor(a) principal: Lima, Maria Gláucia Silva de
• Data de Publicação: 2015
• Outros Autores: http://lattes.cnpq.br/9623092249527057
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM
• Texto Completo: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7951
• topic: Hanseníase; Diagnóstico bacteriológico; Reação em cadeia de polimerase; Genômica; Biópsia cutânea; CIÊNCIAS DA SAÚDE; Hanseníase; Diagnóstico; Reação em Cadeia da Polimerase Quantitativa; Número de genomas

A hanseníase é doença infecto-contagiosa causada pelo Mycobacterium leprae (M. leprae) que afeta principalmente a pele e nervos periféricos e pode causar incapacidades físicas as quais evoluem, potencialmente, para deformidades físicas permanentes. O paciente hanseniano pode ser classificado como paucibacilar e multibacilar, sendo as formas paucibacilares de difícil diagnóstico. Novos métodos moleculares de alta sensibilidade e especificidade como PCR em Tempo Real qPCR, tem contribuído para diagnóstico da hanseníase, principalmente nos casos de difícil diagnóstico. Este estudo foi desenvolvido na Fundação de Dermatologia Tropical e Venereologia Alfredo da Matta, Manaus – Amazonas, no período de março de 2014 a agosto de 2015, e teve o intuito de validar a técnica de qPCR na detecção de M. leprae em biópsias cutâneas de pacientes com suspeita clínica de hanseníase e submetidos a exame histopatológico. As amplificações por qPCR a partir de uma sequência específica do gene 16S de M. leprae foram realizadas em 180 amostras, das quais, 82 eram biópsias frescas e 98 biópsias parafinadas. Das biópsias frescas, foram analisadas 65 amostras, entre as quais estão 9 amostras de pacientes com outras dermatoses, 12 amostras clinicamente inconclusivas e 38 amostras de pacientes com hanseníase. Destes, 68,5% (26/38) foram positivos no teste molecular para a hanseníase e 33,3% (3/9) foram positivas para outras dermatoses. A sensibilidade foi de 68,5%, especificidade de 66,70%, com valor preditivo positivo de 89,7% e valor preditivo negativo de 33,3%. Entre as biópsias parafinadas, foram analisadas somente 61 amostras dos pacientes com hanseníase, as quais 73,8% foram positivas. Nestas amostras, o teste molecular apresentou sensibilidade de 73,8%. Além disso, o número de genomas foi estimado nos dois grupos de biópsias e variou de 8,53 (em uma biópsia parafinada) a 2.060.230 (em uma biópsia fresca). Os dados sugerem claramente que o qPCR confirmam a diferença entre pacientes MB e PB tanto em biópsias frescas quanto em biópsias parafinadas sendo que as quantidades de genomas percentualmente e quantitativamente foi maior em pacientes MB no grupo de amostras frescas quando comparado ao grupo de amostras parafinadas. Curiosamente, os dados quantitativos nas amostras de pacientes PB embora apresentem menor número de genomas, tem também um percentual maior de positividade. A despeito de ajustes necessários para melhorar a eficiência da reação, os resultados nos mostram que o teste pode ser útil, em especial nos casos inconclusivos e de difícil diagnóstico, como nas formas paucibacilares quando o número de genomas for alto (maior que 50) que diminui o risco de falsos positivos.