Avaliação de quatro protocolos de extração de DNAs em amostras teciduais cervicais infectadas pelo papilomavírus humano

• Autor(a) principal: Cavarson, Carolina Harumi
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFGD
• Texto Completo: http://repositorio.ufgd.edu.br/jspui/handle/prefix/3245
• topic: Papillomaviridae; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS; Infecções por Papillomavirus; Patologia molecular; Reação em Cadeia da Polimerase; Papillomavirus Infections; Pathology, Molecular; Polymerase Chain Reaction

O Papilomavírus Humano (HPV) é considerado uma infecção sexualmente transmissível, sendo um fator determinante para o desenvolvimento de câncer cervical. A metodologia de prevenção do câncer de colo de útero preconizada no Sistema Único de Saúde é a análise de alterações citológicas, conhecido popularmente como Papanicolaou. Entretanto o diagnóstico molecular vem sendo indicado como uma técnica mais sensível à presença do vírus, que pode estar inativo nas células hospedeiras, não estando necessariamente causando uma infecção, contudo tendo impacto na prevenção das alterações cancerígenas. Uma das técnicas moleculares capaz de detectar o HPV é a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) sendo necessário primeiro extrair o DNA da amostra coletada, que impacta na sensibilidade da prova diagnóstica. Com o objetivo de padronizar a metodologia de melhor desempenho em fragmentos de tecidos, neste trabalho, comparamos quatro protocolos de extração de DNA total em biópsias tecidual cervical coletadas em mulheres apresentando alterações citológicas compatíveis com a infecção pelo HPV, na cidade de Dourados- MS, Brasil. Foram testados os protocolos 1) HotSHOT; 2) Wizard® Genomic DNA Purification Kit; 3) Boom; 4) Dnaesy Blood and Tissue Qiagen. As amostras extraídas foram submetidos a mensuração por espectrofotometria em microtitulação e amplificados pela reação em cadeia pela polimerase utilizando os oligonucleotídeos iniciadores GH20/PCO4 e Mucosal HPV. Dentre os protocolos testados, o protocolo que apresentou maior taxa absorbância 260/280, de até 4nm, e se apresentou mais eficiente tanto para o controle humano como para o diagnóstico do HPV durante a amplificação foi o protocolo Dnaeasy.