Identificação de proteínas antigênicas e diferencialmente abundantes em Leishmania (Leishmania) amazonensis, L. (Viannia) braziliensis e L. (L.) infantum

• Main Author: Bruna Soares de Souza Lima Rodrigues
• Publication Date: 2017
• Format: Doctoral thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da UFMG
• Download full: http://hdl.handle.net/1843/34824
• topic: Imunoproteoma; Leishmania; Diagnóstico; Redes biológicas; Parasitologia; Imuno-histoquímica; Leishmania; Leishmaniose

As leishmanioses são doenças com ampla diversidade de formas clínicas, devido as diferentes espécies. A leishmaniose tegumentar (LT) está frequentemente associada à infecção por Leishmania (Leishmania) amazonensis e/ou L. (Viannia) braziliensis, enquanto a forma visceral (LV) é causada por L. (L.) infantum. As proteínas por sua vez, estão entre as principais moléculas que podem determinar as mais diversas variações biológicas. Outro aspecto relevante é que um diagnóstico eficiente contribui para a avaliação não só clínica, mas também da epidemiologia e controle da doença. No presente trabalho, por meio de abordagem proteômica de expressão diferencial em gel (DIGE), idenficamos proteínas diferencialmente abundantes entre as espécies de Leishmania mais frequentes no Brasil, L. (L.) amazonensis, L. (Viannia) braziliensis e L. (L.) infantum. Através da utilização de ferramentas de bioinformática, foram mostradas as interações dessas proteínas em redes biológicas, bem como os processos biológicos nos quais essas moléculas atuam. No nosso trabalho destacamos 6 dessas categorias funcionais: metabolismo do nitrogênio, resposta ao stress, organização do citoesqueleto, transporte, desenvolvimento de estruturas e vias associadas à regulação do sistema imune; sendo que, nessa última, o enriquecimento estava presente somente em L. braziliensis e L. infatum. Os dados revelaram que L.infatum, espécie com maior potencial de visceralização, apresentou maior quantidade de proteínas detectadas para quase todos os processos. Selecionamos dentre essas proteínas quais eram também antigênicas de acordo com a forma clínica, LT ou LV, dos soros utilizados no western blot. As proteínas antigênicas foram submetidas a uma análise in silico para a predição de epitopos para células B que não possuíam similaridades com ortólogos em Trypanosoma cruzi. Das 18 proteínas identificadas com essas características (mais abundantes, específicas e antigênicas em uma espécie em relação às outras) oito são das espécies causadoras da forma tegumentar da doença (L. amazonensis e L. braziliensis) e 10 na espécie que causa a forma visceral (L. infantum). Os 68 epitopos preditos simultaneamente pelos softwares ABCPred e BCPreds nessas proteínas, foram sintetizados em membrana de celulose e avaliados em relação a reatividade. Considerando os dados analisados, podemos destacar duas proteínas de L. amazonensis, que apresentam potencial para diagnóstico específico de LT: metalo-peptidase, Clan MA (E)-Familia M3 e uma proteína hipotética. Ambas são mais abundantes nessa espécie, apresentam reatividade exclusiva ao pool de soros de LT e a maioria dos epitopos não apresenta similaridade com os ortólogos em T. cruzi. Além disso, nove epitopos, provenientes das proteínas selecionadas por reatividade exclusiva de soros de pacientes com LT ao extrato de L. amazonensis, foram considerados como potenciais antígenos para o diagnóstico sorológico da LT em humanos.