Aspectos moleculares associados à cardiomiopatia chagásica e à reativação da infecção em pacientes cardiopatas transplantados.

• Autor(a) principal: Priscilla Almeida da Costa
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/33749
• topic: Doença de Chagas; Trypanosoma cruzi; Transplante de coração; Reativação chagásica; Biópsia endomiocárdica; Diagnóstico molecular; Reação em cadeia da polimerase; Bioquímica; Doença de Chagas; Trypanosoma cruzi; Transplante de Coração; Patologia Molecular; Reação em Cadeia da Polimerase

Cerca de 20 a 30% das pessoas infectadas pelo Trypanosoma cruzi manifestam a forma cardíaca da doença de Chagas, desenvolvendo complicações que podem conduzir à insuficiência cardíaca congestiva e morte súbita, tornando a cardiomiopatia chagásica crônica, em seu estágio mais avançado, a terceira principal indicação para o transplante cardíaco no Brasil. Todavia, a imunossupressão, necessária ao controle da rejeição do transplante, configura um aspecto complicador para pacientes chagásicos, porquanto aumenta a chance de reativação da infecção. O diagnóstico diferencial de rejeição do transplante e reativação da infecção chagásica é também considerado difícil, impossibilitando muitas vezes o tratamento correto. Ademais, o motivo pelo qual alguns dos pacientes cardiopatas chagásicos submetidos ao transplante cardíaco apresentam a reativação da doença é ainda desconhecido. Também não são esclarecidos os fatores que determinam as diferentes manifestações clínicas dos pacientes ou que os predispõem à transmissão vertical, por exemplo. Estima-se que esses fatores estejam relacionados tanto à variabilidade genética do parasito quanto do hospedeiro. Nesse sentido, no presente trabalho investigamos: (i) a possibilidade de utilização de metodologias baseadas em PCRs direcionadas para marcadores nucleares (rDNA 24Sα) e mitocondriais (kDNA) para diagnóstico precoce da presença do T. cruzi em corações de pacientes chagásicos transplantados; (ii) a ocorrência de subpopulações de T. cruzi mais associadas à reativação da infecção, utilizando um triplo ensaio para determinação de DTUs (análise dos genes COII, espaçador intergênico do miniéxon e rDNA 24Sα) e análises de polimorfismos de microssatélites (TcCAA10, TcTAT20, TcAAAT6, TcGAG10, TcATT14, TcTAT15); e (iii) a existência de associação de polimorfismos genéticos dos pacientes (genes codificadores das interleucinas IL-1α, IL-6, IL-10 e IL-17) com a reativação chagásica e/ou rejeição pós-transplante pacientes. Para isso, foram analisadas 991 biópsias endomiocárdicas (BEMs), derivadas do acompanhamento pós-transplante cardíaco de 98 pacientes chagásicos, além de 14 biópsias de pele e três obtidas de sistema nervoso central (SNC), em casos de reativação cutânea ou neurológica. A presença de DNA de T. cruzi foi detectada em 205 BEMs, oriundas de 70 pacientes, oito biópsias de pele e nas três de biópsias de SNC. No decorrer dos 10 anos de acompanhamento, dos 70 pacientes que apresentaram alguma PCR positiva para o DNA do parasito, cerca de 73% apresentaram algum episódio de reativação clínica da doença de Chagas, variando entre 4 semanas e 4,35 anos após o transplante. Quando comparada a outras técnicas de diagnóstico (esfregaço sanguíneo, análises histopatológicas da BEM, convencional ou com imuno-histoquímica), observamos que a técnica de PCR, proposta neste trabalho, revelou sensibilidade superior, com boa especificidade, tendo sido capaz de antecipar a reativação clínica da doença de Chagas entre 1,5 e 36 meses (mediana 6, media 9,1 meses). Assim, a adoção dessa metodologia, além de contribuir para o diagnóstico precoce da reativação da infecção, apresenta potencial para auxiliar os médicos nas decisões de tratamento. Em relação aos fatores genéticos do parasito possivelmente associados à reativação, a genotipagem de 184/216 positivas para presença de T. cruzi demonstrou que a maioria dos pacientes teve reativação por TcII, reforçando o fato de que essa é a principal DTU associada à forma cardíaca e às diferentes formas clínicas de reativação chagásica pós-transplante, pelo menos na região geográfica estudada. Todavia, foi observado um caso de infecção inicial por TcI com reativação por TcVI, indicando que as linhagens do parasito podem variar durante os episódios de reativação e que outras DTUs também podem estar associadas à cardiopatia chagásica no sudeste brasileiro. Curiosamente, a comparação entre amostras obtidas de corações explantados e de corações transplantados demonstraram, em todos os casos analisados, que a população do parasito predominante nos episódios de reativação era diferente daquela detectada no coração do paciente na ocasião do transplante, mesmo entre aqueles pacientes que mantiveram a mesma DTU durante a reativação. Em relação aos polimorfismos genéticos do hospedeiro, não foi encontrado associação entre os polimorfismos IL1α (-889 C/T) e IL6 (-174 G/C) e a rejeição ou a reativação chagásica pós-transplante cardíaco em pacientes brasileiros. Entretanto, foi observada associação entre o polimorfismo IL10 (-1082 G/A) e a rejeição ao enxerto cardíaco, sendo que a presença do alelo G (grupo G+, potencialmente maior produtor de IL-10) aumentou o risco da rejeição em 4,2 vezes quando observado no paciente receptor do coração transplantado e 3,1 vezes quando detectado no doador. Além disso, foi encontrada também uma associação entre o polimorfismo da IL-17 (-197 A/G) e a reativação chagásica precoce pós-transplante. Nesse caso, a presença do alelo A no doador (grupo A+, potencialmente maior produtor de IL-17) aumentou em 3,8 vezes mais a chance de ocorrer reativação da infecção em até 120 dias pós-transplante quando comparado ao grupo A- (GG). Esses resultados intrigantes mostram a importância dos genótipos dos doadores e receptores no contexto de rejeição e de reativação chagásica pós-transplante cardíaco, pelo menos em pacientes chagásicos. Paralelamente a estes estudos, nosso último objetivo foi investigar, com uma abordagem de doença de Chagas experimental, contribuições de fatores do parasito e do hospedeiro no tropismo tecidual diferencial, mais especificamente para a placenta, e a transmissão congênita. Para isso, investigamos os efeitos, no ambiente placentário, da infecção de camundongos C57Bl/6J com duas cepas de T. cruzi de diferentes DTUs – VD (TcVI) e K98 (TcI) — analisando a expressão gênica e a persistência parasitária neste tecido. Foi verificado um maior desenvolvimento de resposta imune, no ambiente placentário, contra à infecção pela cepa VD (TcVI), possivelmente consequente do tropismo mais forte ao órgão placentário observado para essa cepa. Reiterando a ideia de que a DTU VI está associada ao aumento do risco para a transmissão vertical da doença de Chagas.