Desenvolvimento e padronização de um teste ELISA para detecção de anticorpos (IgG) anti-Anaplasma marginale em bovinos submetidos ao processo de premunição

• Autor(a) principal: Clovis Jose Braz Junior
• Data de Publicação: 1996
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8PQHQT
• topic: Anaplasma marginale; premunição; bovinos; ELISA; Ensaio imunoenzimatico; Anaplasmose Identificação; Teste imunoenzimático; Bovino Doenças Diagnostico

Um sistema ELISA usando antígeno bruto foi desenvolvido para detecção de anticorpos anti-A. marginale no soro de bovinos. O antígeno foi produzido a partir do sangue de um bezerro esplenectomizado e previamente inoculado com 5xl0 8 hemácias parasitadas, preservadas em nitrogênio liquido. Durante o pico da parasitemia, o sangue foi colhido e, após centrifugação, o plasma e a camada de leucócitos foram descartados. O sedimento obtido foi dividido em duas partes. Em uma parte os leucócitos foram eliminados pela filtração através de coluna contendo areia do mar. Após a filtração, uma porção do material filtrado foi congelada a 70°C com DMSO 30% em PBS. A outra porção do material filtrado foi lisada com uma solução de cloreto de amônia (NH4Cl) 0,9% e congelada a -20°C. A parte do sedimento inicial não filtrada em coluna de areia foi também dividida em duas porções onde uma foi congelada com DMSO 30% e a outra lisada com uma solução de NH4C1 0,9%. Posteriormente todas as preparações foram sonicadas e os sedimentos obtidos após centrifugação foram solubilizados com Triton X-100. Após a sonicação as preparações foram examinadas através da microscopia eletrônica de transmissão. Estruturas típicas do Anaplasma foram visualizadas apenas na preparação antigênica filtrada através da coluna de areia e congelada com DMSO. Diluições ótimas do antígeno e soros referência positivo e negativo foram determinadas por titulação em bloco e o valor discriminante ("cut oft") foi determinado pela média da leitura de 39 soros negativos acrescida de dois desvios padrão. O exame de 337 amostras de soro de bovinos importados e submetidos ao processo de premunição indicou que o ELISA apresentou maior especificidade (94,87%) que a reação de imunofluorescência indireta (71,79%).