Avaliação das características fenotípicas e funcionais de monócitos humanos durante a infecção por Leishmania e submetidos a tratamento com drogas leishmanicidas convencionais e alternativas

• Main Author: Erica Leandro Marciano Vieira
• Publication Date: 2012
• Format: Doctoral thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da UFMG
• Download full: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9XJGKP
• topic: Bioquímica e Imunologia; Bioquímica; Imunomodulação; Leishmaniose Tratamento

A leishmaniose é uma doença endêmica causada pela infecção por diferentes protozoários do gênero Leishmania, afetando milhões de pessoas em todo o mundo. Os monócitos/macrófagos desempenham um importante papel na proteção do hospedeiro contra as infecções por serem capazes de fagocitar e gerar moléculas tóxicas como óxido nítrico (NO) no combate ao parasito. Os receptores do tipo Toll (TLR) possuem um papel essencial na resposta imune contra infecções, mas, pouco se sabe sobre seu papel na infecção humana por Leishmania braziliensis. A busca por novas abordagens quimioterápicas é uma necessidade para o controle e tratamento da leishmaniose. Neste contexto, o estudo de moléculas imunomoduladoras e de compostos naturais com potencial adjuvante ao tratamento convencional desponta como uma importante estratégia. Produtos naturais conhecidos como extratos de plantas medicinais são popularmente utilizados como medicamentos desde tempos antigos. Dentre esses, encontram-se as naftoquinonas obtidas das plantas da família Biognoniaceae, abundante em várias espécies e muitas nativas no Brasil. Esses extratos de plantas já foram estudados em diversas doenças, apresentando atividade antimicrobiana comprovada, além da ação antinflamatória e antineoplásica. Outro composto estudado por suas diversas ações no sistema imunológico foi a N-acetilcisteína (NAC), precursora da glutationa. Sua ação tem sido avaliada na fibrose cística, aterosclerose, infecções por HIV e em diferentes tipos de cânceres. Estudos prévios demonstraram feito da NAC na leishmaniose, em que a sua administração via oral em camundongos infectados por L. major reduziu a lesão cutânea e o parasitismo. Neste trabalho, investigou-se a expressão de TLR9 em células mononucleares do sangue periférico (CMSP), bem como a expressão de moléculas co-estimuladoras e citocinas em monócitos CD14+ de pacientes com leishmaniose cutânea decorrente da infecção por L. braziliensis. Investigaram-se também possíveis candidatos terapêuticos ao tratamento da leishmaniose, como a naftoquinona denominada DT.15 e a NAC, em monócitos de CMSP de indivíduos saudáveis e infectados in vitro por diferentes espécies de Leishmania: Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (Leishmania) infantum e Leishmania (Leishmania) major. Analisou-se a atividade leishmanicida desses compostos, assim como sua influência na expressão de marcadores de ativação, moléculas co-estimuladoras e na produção de citocinas. Os resultados demonstraram redução na frequência de CD80 e CD86, e aumento na frequência de CD16 nos monócitos de pacientes com leishmaniose cutânea em relação aos indivíduos não-infectados (NI). Em seguida, análises de correlações indicaram que as moléculas CD80 e CD40 correlacionaram-se positivamente entre si e com a produção de IL-12, no entanto, negativamente em relação a expressão de CD86. Encontrou-se também uma elevada produção de TNF e uma baixa expressão de IL-12 pelos monócitos dos pacientes com LC, quando comparados aos indivíduos NI. Com relação à expressão de TLR9, encontrou-se uma elevada expressão desse receptor quando as células dos pacientes foram submetidas a cultura com antígeno solúvel de Leishmania (SLA), e quando comparado com os indivíduos NI na presença do estímulo. De forma interessante, a expressão de TLR9 correlacionou-se positivamente com o tamanho da área da lesão nos pacientes. Esses achados sugerem que houve uma regulação negativa na expressão de moléculas co-estimuladoras CD80 e CD86, existindo uma relação tênue entre esses marcadores. No entanto, houve aumento na expressão de TLR9, CD16 e TNF nos monócitos infectados, sugerindo uma imunomodulação dessas células com possíveis mecanismos compensatórios. Na segunda parte dessa tese, notou-se que as drogas DT.15 e NAC apresentaram atividade leishmanicida sobre diferentes espécies de Leishmania, principalmente no tratamento direto das culturas celulares desses parasitos. Demonstrou-se redução do número de parasitos, aumento da taxa de morte e inibição da proliferação celular em relação ao controle sem medicamento. Os resultados das drogas testes (DT.15 e NAC) foram semelhantes aos encontrados com as drogas de tratamento padrão (anfotericina B e Glucantime®). Nos monócitos provenientes de CMSP de indivíduos saudáveis, submetidas à infecção in vitro por diferentes espécies de Leishmania, os resultados encontrados não apresentaram diferenças expressivas como os visualizados nas culturas dos parasitos isolados. No entanto, observaram-se importantes alterações, como baixa citotoxicidade dos compostos testes em células humanas, alteração dos marcadores de ativação, especialmente CD11b, CD80 e CD86. Além disso, visualizou-se como as espécies de Leishmania apresentaram diferenças na expressão de marcadores de ativação e citocinas, bem como os tratamentos com as drogas padrões afetaram diferentemente estas espécies no modelo de infecção in vitro. Assim, os resultados deste estudo demonstraram uma caracterização dos monócitos dos indivíduos infectados em áreas endêmicas, como em modelos de infecção in vitro, sendo relevante uma vez que estas células podem desempenhar um importante papel durante a infecção. Além disso, os compostos avaliados (DT.15 e NAC), apresentaram potencial terapêutico tanto em culturas isoladas de Leishmania, quanto nas células infectadas in vitro. No entanto, novos estudos são necessários para determinar os mecanismos por de trás desses potenciais candidatos.