Estudo do papel da proteína induzida por glicocorticóideAnexina A1 na resolução da resposta inflamatória aguda

• Autor(a) principal: Juliana Priscila Vago da Silva
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8YBGGU
• topic: Biologia Celular; Citologia

A resposta inflamatória é inicialmente caracterizada pela liberação de mediadores próinflamatórios e pela migração de leucócitos para o local da inflamação. Por outro lado, este processo é finamente controlado pela ação de mediadores anti-inflamatórios e/ou próresolutivosque auxiliam na resolução do processo inflamatório e no retorno da homeostase tecidual. Dentre esses mediadores destaca-se a anexina A1 (AnxA1), uma proteína induzida por glicocorticóides (GC) que medeia diversas funções destes anti-inflamatórios. AnxA1 age como um potente modulador endógeno da inflamação, impedindo a ação de enzimas queatuam na produção de mediadores pró-inflamatórios, inibindo a transmigração dos leucócitos e induzindo a fagocitose de células apoptóticas. Assim, o presente estudo investigou a participação de AnxA1 na resolução da resposta inflamatória espontânea e induzida por antiinflamatórios. Para tal, foi utilizado o modelo murino de pleurisia induzida por LPS (lipolissacarídeo) onde camundongos BALB/c foram injetados com 250 g de LPS por via intrapleural. Posteriormente, as células presentes no lavado pleural foram coletadas em diferentes intervalos pós-injeção e analisadas quanto ao número total e diferencial de leucócitos, número de células com morfologia apoptótica, vias de sinalização envolvidas com apoptose, sobrevivência celular e a expressão da proteína AnxA1. Os resultados mostraram que a injeção de LPS induziu um acúmulo de neutrófilos na cavidade pleural que foi máximo entre 8-24h, diminuiu em 48h ocorrendo resolução completa no tempo de 72h. A resolução natural, avaliada pelo decréscimo no número de neutrófilos observado nos tempos 48-72h, foi acompanhada pelo aumento de células mononucleares e foi associada ao aumento de eventos apoptóticos entre 8-48h, como demonstrado por critérios morfológicos (contagem de células apoptóticas) e bioquímicos (aumento de caspase-3 clivada e Bax). A proteína AnxA1 naforma ativa intacta (37 kDa) foi detectada em animais injetados com PBS, diminuiu intensamente na fase ativa da inflamação neutrofílica (4-24h) e aumentou durante a resolução natural, como visto em 48-72h após desafio com LPS. Observou-se um predomínio de clivagem da proteína AnxA1 (banda de 33 kDa) nos intervalos de tempo onde ocorreu maior recrutamento de neutrófilos. O tratamento de animais com drogas anti-inflamatórias, as quais foram previamente demonstradas induzirem resolução no mesmo modelo inflamatório, a saber: rolipram (um inibidor de PDE4), wortmannin (inibidor de PI3K) e dexametasona (glicocorticoide sintético) diminuiu o número de neutrófilos na cavidade pleural, com um aumento na expressão da proteína AnxA1 na forma ativa e prevenção da clivagem da mesma. Ainda, o aumento de AnxA1 induzido por estas drogas, foi associado com ativação de proteínas pró-apoptóticas (aumento de Bax e clivagem de caspase-3) e inibição dafosforilação de proteínas associadas com a sobrevivência celular (P-ERK1/2 e P-IkB-a). A relevância funcional da AnxA1 para a resolução da pleurisia foi determinada utilizando duas estratégias, um anticorpo neutralizante para a proteína ou um antagonista inespecífico doreceptor onde AnxA1 atua (FPR2/ALXR): ambos os tratamentos inibiram a resolução da inflamação espontânea e induzida por dexametasona, a expressão de AnxA1 e a apoptose de neutrófilos. O efeito direto da participação da AnxA1 na resolução da inflamação aguda foi avaliado utilizando Ac2-26, um peptídeo ativo da porção N-terminal da proteína. A injeção de Ac2-26, por duas diferentes vias de administração, local e sistêmica, diminuiu o número de neutrófilos na cavidade pleural, sem alterar o número de células mononucleares, e aumentou a apoptose de neutrófilos, efeito que foi impedido pela injeção do pan inibidor de aspase zVAD-fmk. Mecanisticamente, a resolução da inflamação promovida pela injeção do peptídeo Ac2-26 foi associada à apoptose de neutrófilos com aumento de Bax e clivagem de caspase-3, decréscimo dos níveis de Mcl-1 e da fosforilação de P-ERK1/2 e P-IkBa,proteínas já demonstradas serem importantes para sobrevivência do neutrófilo. Nossos dados in vivo, utilizando um modelo dinâmico de inflamação aguda, fornecem evidências de que AnxA1 seja um mediador da resolução natural e induzida por anti-inflamatórios com intenso efeito sobre a apoptose de neutrófilos.