Variabilidade genética de amostras brasileiras de herpesvírus bovino 1 e 5

• Autor(a) principal: Maria Emilia de Oliveira
• Data de Publicação: 2005
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-ADQPS9
• topic: Microbiologia; Microbiologia; Vírus do herpes em animais; Variabilidade genética; Herpesvírus 5 bovino; Herpesvirus bovino 1

Os principais herpesvírus bovinos identificados no Brasil são o herpesvírus bovino 1 (BHV-1) e o herpesvírus bovino 5 (BHV-5). O BHV-1 causa infecção do trato respiratório, podendo provocar também conjuntivite e aborto e o BHV-5 é o agente causal da encefalite bovina. Devido às extensas reações sorológicas cruzadas existentes entre eles a diferenciação entre BHV-1 e 5 tem sido feita através de análises do perfil de restrição do genoma destes vírus e ainda pela reação em cadeia pela polimerase. Como o BHV-1 e 5 exibem 85% de similaridade no seu genoma, o fragmento amplificado pode ser de mesmo tamanho nos dois vírus e por isto o PCR tem sido usado em conjunto com a RFLP. A caracterização molecular das amostras brasileiras de BHV ainda não está bem estabelecida, portanto, o presente trabalho foi desenvolvido com os objetivos de realizar uma caracterização biológica das amostras brasileiras de BHV-1 e 5, estabelecer um método de diferenciação entre elas, e determinar sua diversidade genética quanto a gB e relação filogenética. A caracterização biológica foi realizada pela observação do comportamento das amostras em cultivo celular. Para a obtenção do DNA viral foram testadas três diferentes metodologias, e a técnica de extração que utiliza o NaOH foi escolhida e otimizada. O DNA obtido tanto a partir de amostras de cultivo celular quanto de amostras clínicas foi utilizado na PCR, e a diferenciação entre as amostras de BHV-1 e 5 foi realizada pela RFLP do fragmento amplificado do gene que codifica para a glicoproteína B. O fragmento amplificado foi seqüenciado sendo observada a diversidade genética quanto a gB das amostras. Como resultado pudemos observar diferenças no efeito citopático entre as amostras de BHV-1 e BHV-5 infectadas em células MDBK. Após a otimização de metodologias de extração de DNA viral a escolhida para uso em nossos experimentos foi aquela em que se utiliza o NaOH, sendo a que apresentou um custo menor, foi a mais rápida e eficiente. O uso em conjunto da extração do DNA com NaOH e a PCR/RFLP foi ferramenta para uma rápida diferenciação entre as amostras de BHV-1 e 5, sugerindo o seu uso no diagnóstico direto de amostras clínicas. Foi observado uma conservação significativa entre as seqüências de nucleotídeos e de aminoácidos de parte do gene que codifica para a gB das amostras brasileiras analisadas neste trabalho com as e outros vírus da família Herpesviridae. A análise filogenética confirmou a proximidade entre as amostras analisadas neste estudo com as amostras de herpesvírus de bovino, búfalo, rangiferino e cervídeo.