Padronização de um ELISA indireto para o diagnóstico da imunodeficiência felina a vírus

• Autor(a) principal: Fabiana Alves
• Data de Publicação: 2010
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8EHKP4
• topic: Western blot; Imunodeficiência felina; Vírus da imunodeficiência felina; r-p24; Ocorrência; PCR; ELISA; Veterinária; Gato Doenças; Vírus da imunodeficiência em felino; Teste imunoenzimático

O Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV) é um lentivírus que infecta os membros da família Felidae. A infecção causada pelo FIV leva a uma doença crônica e à imunodeficiência. O diagnóstico baseado apenas nos sinais clínicos não é confiável, o que torna necessário o diagnóstico laboratorial. O objetivo do presente trabalho foi estabelecer e padronizar uma prova de ELISA indireto, utilizando-se o antígeno recombinante da proteína de capsídeo p24, a r-p24, baseado na sequência genômica do FIV-B. Adicionalmente, uma avaliação da ocorrência da infecção na região metropolitana de Belo Horizonte foi realizada, utilizando-se as técnicas de PCR e imunocromatografia SNAP Combo Plus. Os resultados conflitantes quando comparado aos dois testes, foram confirmados a partir do Western blot utilizando-se a r-p24. Foram utilizadas 150 amostras de soro durante o experimento: 78 de gatos assintomáticos de proprietários particulares e de abrigos da região metropolitana de Belo Horizonte, Minas Gerais, e outras 72 amostras doadas pelo Departamento de Clínica Veterinária da Universidade de São Paulo (USP), SP, previamente testadas pelo SNAP Combo Plus e por PCR. Para a PCR foram utilizados oligonucleotídeos iniciadores para amplificação de um fragmento de 244 pares de bases (pb) dentro da região correspondente ao gene gag do FIV. Para a técnica de Western blot foi utilizado o antígeno recombinante da proteína de capsídeo, a r-p24 (3,14 g/cm = 0,095 g/animal). O ELISA indireto foi padronizado utilizando-se 2,5 ng/ml da r-p24, soro na diluição de 1:320 e conjugado (peroxidadse anti-felino IgG) na diluição de 1:7500. O r-p24 ELISA apresentou uma sensibilidade de 97% e uma especificidade de 93%, quando comparado ao teste ouro SNAP Combo Plus, com índice Kappa igual a 0,83. A partir da análise da ocorrência do FIV em Belo Horizonte, três animais (3,85%) foram positivos para o FIV, demonstrando que animais assintomáticos infectados são potenciais transmissores do vírus. Baseado nos dados obtidos da estabilização e padronização do teste, conclui-se que o r-p24 ELISA é uma técnica sensível, específica e prática para o diagnóstico de rotina e ou pesquisa da infecção pelo FIV.