Caracterização estrutural e funcional de um homólogo à exotoxina esfoliativa D de Staphylococcus aureus envolvido na mastite subclínica de pequenos ruminantes

• Autor(a) principal: Natayme Rocha Tartaglia
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9UKG2Y
• topic: Genética; Mastite; Toxinas; Bovino de leite Doenças; Genética; Staphylococcus aureus

A mastite é a mais comum e cara doença que afeta o gado leiteiro, sendo o Staphylococcus aureus o micro-organismo mais frequentemente isolado de casos clínicos dessa infecção. A enfermidade é caracterizada pela inflamação da glândula mamária, com sintomas locais que podem resultar em infecção sistêmica. Uma melhor compreensão dos fatores envolvidos na patogenicidade, assim como da resposta do hospedeiro à infecção por esse micro-organismo, são pontos essenciais para o desenvolvimento eficiente e satisfatório de terapias que permitam prevenir e combater a mastite. Embora considerado um patógeno oportunista, certas linhagens de S. aureus são mais aptas a causar patologias do que outras, devido a grande variedade de fatores de virulência associados a eles. Sendo assim, através de análises sorológicas do proteoma (SERPA), que permitem a identificação de proteínas imunorreativas diferencialmente expressas, o perfil patogênico das linhagens S. aureus O46, característica de mastite subclínica, e S. aureus O11, característica de uma mastite gangrenosa, foi avaliado. Baseado nesses dados, o objetivo do presente trabalho foi caracterizar uma proteína, codificada pela ORF O46_2740, imunoreativa somente na S. aureus O46 e homóloga a toxina esfoliativa D. Essa toxina é descrita como epidermiolítica e já foi associada a formação de impetigo bolhoso e síndrome da pele escaldada estafilocócica (SSSS). O modelo tridimensional por homologia da ORF O46_2740 foi elaborado in silico, utilizando um molde ETB depositado em bancos de dados. Para a caracterização in vivo, construímos linhagens recombinantes de L. lactis na forma secretada, utilizando o sistema de expressão XIES, induzido por xilose. Os clones foram avaliados por imunodetecção e não foi possível confirmar a expressão nesse sistema. Como alternativa, a ORF foi sintetizada com códons preferenciais para E. coli e avaliado em cinco linhagens de expressão, o qual uma obteve melhor resultado. A ETD-like foi purificada e posteriormente confirmada por Western blotting utilizando anticorpo monoclonal anti-His. A fração solúvel foi dosada e aplicada no dorso de camundongos neonatos Balb/c para avaliação da formação de bolhas e esfoliação característica da toxina. Os resultados preliminares da avaliação in vivo apontam reações bolhosas, porém, novos ensaios são necessários para corroborar a atividade esfoliativa.