Atividade antagonista de extrato intracelular obtido de Fusobacterium necrophorum: modo de ação e caracterização bioquímica

• Autor(a) principal: Carolina Nicolai Valeff
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8G2JGR
• topic: Bactérias anaeróbias; Fusobacterium necrophorum; Substâncias antagonistas; Bacteriocina; Microbiologia; Fusobacterium; Bacteriocinas; Bactérias anaeróbias

Fusobacterium necrophorum é considerado membro da microbiota indígena da cavidade oral, intestino e trato geniturinário de animais e está associado a etiopatogenia de diversas doenças que acometem seres humanos e outros animais, expressando uma gama de fatores de virulência para tanto. A habilidade de produção de substâncias antagonistas, capazes de inibir a multiplicação ou matar bactérias competidoras, é considerada importante fator de virulência bacteriana. Dentre elas, destacam-se as bacteriocinas, um grupo heterogêneo de compostos antibacterianos de natureza peptídica. Nosso grupo demonstrou, pela primeira vez, a produção de substância(s) antagonista(s) por F. necrophorum ativas contra bactérias de outras espécies, bem como a natureza proteica de tais substâncias. A presente investigação teve como objetivo contribuir para a compreensão bioquímico-molecular dessas moléculas. O extrato intracelular, precipitado com sulfato de amônio à saturação de 50% de (C50) obtido a partir de cultura de F. necrophorum ATCC 25286, foi capaz de matar a amostra reveladora Peptostreptococcus anaerobius. A atividade foi completamente perdida quando C50 foi submetido à temperatura igual ou superior a 45°C e quando exposto a proteases. O extrato manteve-se estável em uma ampla faixa de valores de pH (6,0 a 11,0) e quando incubado junto a solventes orgânicos e sua atividade antibacteriana foi quase completamente perdida após tratamento com EDTA e recuperada com o acréscimo de zinco. A concentração inibitória mínima de C50 para P. anaerobius foi 6,25UA/mL, coincidindo com a concentração bactericida mínima. Em 30 minutos, todas as células bacterianas de P. anaerobius estavam mortas. A tentativa de purificação da substância antagonista foi realizada com fracionamento por precipitação com sulfato de amônio à saturação de 50%, cromatografia de troca iônica, seguida por exclusão e, finalmente, por fase reversa. Entretanto, a purificação não foi alcançada.