Produção de antígenos imunizantes em sistema de expressão procarioto para o desenvolvimento de estratégias profilático-terapêutica contra o Papilomavírus Humano

• Autor(a) principal: SILVA, Anna Jéssica Duarte
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFPE
• Texto Completo: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/19540
• topic: HPV; Câncer Cervical; Vacina; Imunização; Expressão heteróloga; HPV; Cervical Cancer; Vaccine; Immunization; Heterologous expression

A infecção pelo Papilomavírus Humano, além de representar uma doença sexualmente transmissível altamente disseminada, é responsável por 5% dos cânceres em humanos, destacando o câncer cervical com altos índices de incidência e mortalidade. Embora comprovadamente eficazes, as vacinas vigentes não combatem infecções já estabelecidas e apresentam um elevado custo de produção. Esse cenário revela a necessidade de estratégias vacinais alternativas. O presente trabalho propõe a expressão de diferentes genes recombinantes em Escherichia coli, uma plataforma biotecnológica econômica, de fácil manipulação e de alto rendimento. Os genes recombinantes utilizados foram: L1 de HPV16 e construções quiméricas basedas na substituição de epítopos da oncoproteína E5 na alça h4 e na região C-terminal de L1, com potencial para geração de antígenos profiláticoterapêuticos e na substituição de epítopos da proteína L2 na região da alça h4 para avaliação de possível neutralização cruzada. Após subclonagem em pGEM-T, esses genes foram clonados em vetor de expressão pAE e linhagens de Escherichia coli BL21 e Rosetta foram transformadas com os vetores de expressão gerados. A confirmação da produção das proteínas se deu por Western blot, a partir de extratos de culturas induzidas com IPTG. Otimizações nos protocolos de indução, lise e preparo das amostras foram realizadas ao longo dos experimentos. Os resultados obtidos demonstraram a produção dos antígenos recombinantes, e deverão ser validados em futuros ensaios imunológicos quanto à capacidade de induzir respostas imunes em animais desafiados.