Produção de antígenos recombinantes para os genes E5 e L1 do Papilomavirus humano tipo 16 em Leishmania tarentolae

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: MACIEL, Alline Santos Araujo
Data de Publicação: 2017
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPE
Texto Completo: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/39595
Resumo: MACIEL, Alline Santos Araujo também é conhecido(a) em citações bibliográficas por: ARAUJO, Alline Santos
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O desenvolvimento do câncer no colo do útero está intimamente associado à presença da infecção por HPV em 95% dos casos, sendo alguns tipos virais classificados de alto risco oncogênico, como o HPV 16. Alguns genes do HPV apresentam um papel muito importante para o estabelecimento da infecção, como os genes L1, L2 e E5. As vacinas disponíveis atualmente (profiláticas) são obtidas a partir da expressão da proteína L1 de tipos oncogênicos do HPV em sistemas heterológos. A proteína L2, apesar de ser encontrada em menor quantidade, desempenha um papel importante na infecção pelo HPV. Alguns estudos têm sido realizados para expressão da proteína E5 com a finalidade de desenvolvimento de uma vacina terapêutica, entretanto não existe ainda uma vacina deste tipo disponível comercialmente. Neste trabalho, foi proposto utilizar o sistema heterólogo da Leishmania tarentolae para expressar as proteínas L1, L2 e E5 de HPV 16. Esse protozoário é de fácil manipulação, utilizando meio simples, com produção de proteínas em maior quantidade em um tempo mais curto (em relação a outros sistemas eucarióticos), e pode ser cultivada em laboratório NB1, possibilitando reduzir custos de produção de vacinas anti-HPV. O vetor de expressão utilizado foi pLEXSY-Hyg2 que permite a expressão de proteínas recombinantes por recombinação homóloga no sistema proposto. A expressão das proteínas foi avaliada em amostras de sobrenadante da cultura e pellets lisados de células de L. tarentolae por SDS-PAGE e Western Blotting. Contudo, alguns genes não se encontravam na matriz de leitura correta impossibilitando a visualização da expressão e para outro gene foi possível a visualização transitória de uma proteína com tamanho adequado, porém sem a visualização do controle positivo. Tais resultados sugerem análises complementares para contornar os problemas evidenciados durante o estudo.CAPESHPV infection is considered a public health problem and the most common sexually transmitted disease in the population. The development of cervical cancer is closely associated with the presence of HPV infection in 95% of cases, and some viral types are classified as high oncogenic risk, such as HPV 16. Some HPV genes play a very importante role in establishing Such as the L1, L2 and E5 genes. Currently available (prophylactic) vaccines are obtained from the expression of L1 protein of oncogenic types of HPV in heterologous systems. L2 protein, despite being found in lesser amounts, plays an importante role in HPV infection. Some studies have been carried out to express E5 protein for the purpose of developing a therapeutic vaccine, however, a commercially available vaccine of this type is not yet available. In this work, it was proposed to use the heterologous system of Leishmania tarentolae to express the proteins L1, L2 and E5 of HPV 16. This protozoan is easy to manipulate, using simple medium, producing more proteins in a shorter time To other eukaryotic systems), and can be grown in laboratory NB1, making it possible to reduce production costs of anti-HPV vaccines. The expression vector used was pLEXSY-Hyg2 which allows the expression of recombinant proteins by homologous recombination in the proposed system. Expression of the proteins was evaluated in culture supernatant and lysed pellets from L. tarentolae cells by SDS-PAGE and Western Blotting. However, some genes were not found in the correct reading matrix, making it impossible to visualize the expression and for another gene it was possible to transiently visualize a protein of adequate size, but without visualization of the positive control. These results suggest complementary analyzes to overcome the problems evidenced during the study.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Biotecnologia IndustrialUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessCâncer cervicalPapilomavirusVacinaProdução de antígenos recombinantes para os genes E5 e L1 do Papilomavirus humano tipo 16 em Leishmania tarentolaeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPEORIGINALDISSERTAÇÃO Alline Santos Araujo.pdfDISSERTAÇÃO Alline Santos Araujo.pdfapplication/pdf1151594https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/39595/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Alline%20Santos%20Araujo.pdf3b843b232f498abccff054de4c3336c6MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-8811https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/39595/2/license_rdfe39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34MD52LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; 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