Construção de candidatos a vacinas de DNA baseados nos genes prM e envelope do Zika vírus
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Data de Publicação: | 2017 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPE |
Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/30941 |
Resumo: | Diretamente associado ao surto de casos de malformações fetais e ao aumento de casos de adultos afetados com a Síndrome de Guillain-Barré na América Latina, e especialmente no Brasil, o Zika vírus (ZIKV) é alvo de diversas pesquisas em todo mundo. Assim como o vírus da Dengue e da Febre Amarela, o ZIKV pertence a família Flaviviridae e tem como principais vetores de transmissão os mosquitos do gênero Aedes, mas pode ser transmitido por outras vias tais como por relações sexuais e fluídos corporais. Desse modo, e frente a sua rápida disseminação, o desenvolvimento de estratégias profiláticas e terapêuticas contra a infecção por ZIKV é de fundamental importância. Atualmente, não há ainda nenhuma vacina profilática disponível contra o ZIKV. Assim, neste trabalho foram desenvolvidos candidatos a vacinas de DNA baseados nos genes prM e Envelope que foram selecionados em razão da resposta imune humoral que são capazes de elicitar. Três construções foram desenvolvidas neste estudo: a primeira contendo a sequência completa do Envelope (E), a segunda contendo apenas os últimos 34 aminoácidos da região C-terminal de prM e a sequência completa do Envelope (prM34.E), e a terceira trata-se do Envelope com uma deleção de seus os últimos 108 aminoácidos da região C-terminal (EnvΔ108). Todas as construções foram clonadas no vetor pGEM-T easy, subclonadas no vetor de expressão para células de mamíferos pVAX1 e transfectadas em culturas de células Vero. Após as transfecções, a detecção das proteínas de interesse foi realizada por western blot e a verificação da transcrição gênica por meio de RT-PCR. Os resultados obtidos demonstraram a expressão de E, mas não foi possível a detecção da expressão de prM34.E e EnvΔ108. De modo similar, apenas foi possível a detecção da proteína E. Sendo, portanto, necessárias otimizações aos protocolos para futuras detecções. A eficiência da construção E como candidato vacinal deve ser avaliada em futuros ensaios imunológicos em animais. |
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LEAL, Lígia Rosa Saleshttp://lattes.cnpq.br/1537464603271827http://lattes.cnpq.br/3473903684822728FREITAS, Antonio Carlos deJESUS, André Luiz Santos de2019-06-04T22:21:44Z2019-06-04T22:21:44Z2017-07-27https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/30941Diretamente associado ao surto de casos de malformações fetais e ao aumento de casos de adultos afetados com a Síndrome de Guillain-Barré na América Latina, e especialmente no Brasil, o Zika vírus (ZIKV) é alvo de diversas pesquisas em todo mundo. Assim como o vírus da Dengue e da Febre Amarela, o ZIKV pertence a família Flaviviridae e tem como principais vetores de transmissão os mosquitos do gênero Aedes, mas pode ser transmitido por outras vias tais como por relações sexuais e fluídos corporais. Desse modo, e frente a sua rápida disseminação, o desenvolvimento de estratégias profiláticas e terapêuticas contra a infecção por ZIKV é de fundamental importância. Atualmente, não há ainda nenhuma vacina profilática disponível contra o ZIKV. Assim, neste trabalho foram desenvolvidos candidatos a vacinas de DNA baseados nos genes prM e Envelope que foram selecionados em razão da resposta imune humoral que são capazes de elicitar. Três construções foram desenvolvidas neste estudo: a primeira contendo a sequência completa do Envelope (E), a segunda contendo apenas os últimos 34 aminoácidos da região C-terminal de prM e a sequência completa do Envelope (prM34.E), e a terceira trata-se do Envelope com uma deleção de seus os últimos 108 aminoácidos da região C-terminal (EnvΔ108). Todas as construções foram clonadas no vetor pGEM-T easy, subclonadas no vetor de expressão para células de mamíferos pVAX1 e transfectadas em culturas de células Vero. Após as transfecções, a detecção das proteínas de interesse foi realizada por western blot e a verificação da transcrição gênica por meio de RT-PCR. Os resultados obtidos demonstraram a expressão de E, mas não foi possível a detecção da expressão de prM34.E e EnvΔ108. De modo similar, apenas foi possível a detecção da proteína E. Sendo, portanto, necessárias otimizações aos protocolos para futuras detecções. A eficiência da construção E como candidato vacinal deve ser avaliada em futuros ensaios imunológicos em animais.Directly associated with the outbreak of fetal malformations and the increase of cases of adults affected with Guillain-Barré Syndrome in Latin America, and especially in Brazil, Zika virus (ZIKV) is the subject of several researches worldwide. Like Dengue and Yellow Fever viruses, ZIKV belongs to the Flaviviridae family and has as main transmission vector the mosquitoes from the genus Aedes. But also, it can be transmitted by other routes such as sexual relations and body fluids. Thus, in view of its rapid spread, the development of prophylactic and therapeutic strategies against ZIKV is extremely important. Currently, there are no prophylactic vaccines available against ZIKV. In this sense, in this work we developed candidates for DNA vaccines based on the prM and Envelope genes of ZIKV, which were selected for the humoral immune response that they can elicit. Three constructs were developed in this study: the first containing the complete Envelope (E) sequence, the second containing only the last 34 amino acids of the C-terminal region of prM and the complete Envelope sequence (prM34.E), and the third was Envelope with a deletion of the last 108 amino acids of the C-terminal region (EnvΔ108). All constructs were cloned into the pGEM-T easy vector, and then subcloned into the expression vector for mammalian cells pVAX1 and transfected into Vero cell cultures. After the transfections, detection of proteins of interest was performed by western blot and the verification of gene transcription was done by RT-PCR. The results obtained demonstrated expression of E, although expression of prM34.E and EnvΔ108 was detected. Similarly, only E protein detection was possible, and protocol optimizations are required for future detection. The efficacy of the E-construct as a vaccine candidate should be evaluated in future animal immunological assays.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em MorfotecnologiaUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessZika vírusVacinasEpidemiologiaConstrução de candidatos a vacinas de DNA baseados nos genes prM e envelope do Zika vírusinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPETHUMBNAILDISSERTAÇÃO Lígia Rosa Sales Leal.pdf.jpgDISSERTAÇÃO Lígia Rosa Sales Leal.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1179https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/30941/5/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20L%c3%adgia%20Rosa%20Sales%20Leal.pdf.jpg55bb577572e1dcf774c7293b2add7859MD55ORIGINALDISSERTAÇÃO Lígia Rosa Sales Leal.pdfDISSERTAÇÃO Lígia Rosa Sales Leal.pdfapplication/pdf1305119https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/30941/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20L%c3%adgia%20Rosa%20Sales%20Leal.pdf9f965c03d6059d18665973eb4fbb2d63MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; 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