Aplicação do antígeno recombinante LBK39 e seus respectivos peptídeos PepLi379 e PepLi409 sintéticos no diagnóstico e protocolos vacinais das leishmanioses

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Pereira, Joyce Carvalho
Data de Publicação: 2020
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/85187
Resumo: Orientadora: Profa. Dra. Vanete Thomaz Soccol
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spelling Universidade Federal do Paraná. Setor de Tecnologia. Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e BiotecnologiaThomaz-Soccol, Vanete, 1954-Pereira, Joyce Carvalho2023-11-24T13:40:45Z2023-11-24T13:40:45Z2020https://hdl.handle.net/1884/85187Orientadora: Profa. Dra. Vanete Thomaz SoccolTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia. Defesa : Curitiba, 28/11/2020Inclui referênciasResumo: A Leishmaniose visceral possui importância mundial por ser uma zoonose. Esta doença possui como reservatório principalmente os cães e é causada Leishmania infantum. Os cães possuem papel importante na manutenção do parasito e infecção em humanos. Esses animais são capazes de se moverem por diversas regiões, o que contribui para a dispersão do parasito. Há cerca 1,3 milhão de novos casos/ano, ocasionando de 20 a 30 mil mortes. Os testes diagnósticos utilizados atualmente apresentam baixa sensibilidade e especificidade, e não são capazes de detectar presença da doença em fases assintomáticas, apresentando falsos negativos. Para contribuir com a melhoria e acesso ao diagnóstico nosso grupo desenvolveu previamente um novo antígeno recombinante relacionado à cinesina de Leishmania braziliensis, a Lbk39, no qual mostrou 59% de aminoácidos idênticos à L. infantum. A proteína foi testada como antígeno em diagnóstico de leishmaniose visceral canina. A Lbk39 foi sintetizada utilizando o vetor pLEXSY-sat2 e transfectada em células de Leishmania tarentolae por eletroporação. No presente trabalho, tanto a Lbk39 quanto seus peptídeos PepLi379 e PepLi409 foram utilizados como antígenos e determinadas a sensibilidade e especificidade dos mesmos. A Lbk39 apresentou 100% de sensibilidade e 96,1% de especificidade, e seus peptídeos, PepLi379 e PepLi409, 95% e 87,8% de sensibilidade, e 100% e 95% de especificidade, respectivamente. Mostrando que ambos os antígenos têm potencial para serem utilizados em testes para diagnóstico em cães. Com isso, tanto a Lbk39 quanto seus peptídeos apresentaram potenciais para serem utilizados em diagnóstico de leishmaniose visceral canina. Em relação a leishmaniose humana visceral, os peptídeos, PepLi379 e PepLi409, obtiveram 41,7 e 83,3% de sensibilidade e 95,8% e 100% de especificidade. Já para leishmaniose cutânea humana, apresentaram 42,9 e 93,5% de sensibilidade e 91,7 e 87,5% de especificidade. Mostrando que apenas o PepLi409 apresenta potencial para uso diagnóstico, tanto para leishmaniose visceral humana quanto para cutânea. A partir desses resultados, foi estudado o potencial vacinal destes peptídeos. Foram utilizados camundongos BALB/c, os quais receberam duas doses de imunização por via intranasal, com intervalo de 7 dias entre elas. Após 7 dias da última dose da vacina, os animais foram desafiados com 2x106 promastigota de L. infantum no coxim plantar da pata direita via subcutânea. O perfil clínico da doença foi verificado pela observação física e integridade dos animais. A carga parasitária do baço, do linfonodo poplíteo e do fígado foram quantificados pela técnica de diluição limitante nos dias 60 e 90 pós-desafio, com a eutanásia dos animais. O perfil das citocinas foi avaliado com o plasma dos camundongos. O grupo que recebeu as composições PepLi409 e Mix dos peptídeos, apresentaram diferença significativa na carga parasitária dos órgãos em relação ao seu controle e aos demais grupos vacinais e, a análise do perfil de citocinas no soro dos animais, mostrou um aumento da produção de IFN-?. Esses resultados sugerem que estas composições são candidatos ideias para uso vacinal contra leishmaniose humana.Abstract: Visceral Leishmaniasis has worldwide importance because it is a zoonosis. This disease has as a reservoir mainly dogs and is caused by Leishmania infantum. Dogs play an important role in maintaining the parasite and infection in humans. These animals are able to move through different regions, which contributes to the dispersion of the parasite. There are about 1.3 million new cases / year, causing 20 to 30 thousand deaths. The diagnostic tests currently used have low sensitivity and specificity, and are not able to detect the presence of the disease in asymptomatic phases, presenting false negatives. To contribute to the improvement and access to diagnosis, our group developed a new recombinant antigen related to Leishmania braziliensis kinesin, Lbk39, in which it showed 59% of amino acids identical to Leishmania infantum. The protein was tested as an antigen in the diagnosis of canine visceral leishmaniasis. Lbk39 was synthesized using the vector pLEXSY-sat2 and transfected into Leishmania tarentolae cells by electroporation. In the present work, both Lbk39 and its peptides PepLi379 and PepLi409 were used as antigens and their sensitivity and specificity were determined. Lbk39 showed 100% sensitivity and 96.1% specificity, and its peptides, PepLi379 and PepLi409, showed 95% and 87.8% sensitivity, and 100% and 95% specificity, respectively. Showing that both antigens have the potential to be used in diagnostic tests in dogs. Thus, both Lbk39 and its peptides showed potential to be used in the diagnosis of canine visceral leishmaniasis. In relation to human visceral leishmaniasis, the peptides, PepLi379 and PepLi409, obtained 41.7, 83.3% sensitivity, 95.8%, and 100% specificity. As for human cutaneous leishmaniasis, they had 42.9, 93.5% sensitivity, and 91.7 and 87.5% specificity. Showing that only PepLi409 has potential for diagnostic use, both for human visceral and cutaneous leishmaniasis. From these results, the vaccine potential of these peptides was studied. BALB / c mice were used, which received two doses of immunization intranasally, with an interval of 7 days between them. 7 days after the last dose of the vaccine, the animals were challenged with a 2x106 L. infantum promastigote in the footpad of the right leg, subcutaneously. The clinical profile of the disease was verified by the physical observation and integrity of the animals. The parasitic load of the spleen, popliteal lymph node and liver were quantified by the limiting dilution technique on days 60 and 90 post-challenge, with the euthanasia of the animals. The cytokine profile was evaluated with the plasma of the mice. The group that received the PepLi409 and Mix peptide compositions showed a significant difference in the parasitic load of the organs in relation to their control and the other vaccine groups, and the analysis of the cytokine profile in the animals' serum showed an increase in IFN-? production. These results suggest that these compositions are ideal candidates for vaccine use against human leishmaniasis.1 recurso online : PDF.application/pdfLeishmaniaPeptídeosTecnologia QuímicaAplicação do antígeno recombinante LBK39 e seus respectivos peptídeos PepLi379 e PepLi409 sintéticos no diagnóstico e protocolos vacinais das leishmaniosesinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - T - JOYCE CARVALHO PEREIRA.pdfapplication/pdf6002813https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/85187/1/R%20-%20T%20-%20JOYCE%20CARVALHO%20PEREIRA.pdf2965f64179bf840e9d4565e5e312d722MD51open access1884/851872023-11-24 10:40:45.313open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/85187Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082023-11-24T13:40:45Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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