Cultivo in vitro em well-of-the-well de embriões quimeras de mus musculos domesticus

• Autor(a) principal: Marques, Lis Santos
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/142926
• topic: Cultivo in vitro; Embrioes; Reprodução animal; Sistema de cultivo; Chimeras; In vitro culture (IVC); Microwells; Well-of-the-Well (WOW); Murine embryos

O desenvolvimento in vitro de quimeras a partir da agregação de diferentes massas celulares embrionárias, produzindo um único indivíduo com duas ou mais linhagens celulares, é uma técnica que pode ser empregada na produção de clones. O experimento teve como objetivo comparar a eficiência do cultivo in vitro (CIV) de quimeras pelo sistema Well-of-the- Well (WOW) modificado por Feltrin et al. (2006) com o sistema de microgotas (PEURA et al., 1998). Fêmeas da espécie Mus musculos domesticus, da linhagem CF1 suiça Albina, foram induzidas à superovulação e após acasaladas com machos inteiros. Quarenta e oito horas após a observação do tampão vaginal foi realizada a coleta dos embriões nos estádios de quatro, oito e 16 células. Os embriões, com exceção do grupo controle, foram expostos a enzima pronase 26 UI/mL diluída em PBSm, para a remoção da zona pelúcida (ZP). O CIV foi realizado em meio KSOM suplementado com 0,4% de BSA, durante 72 h. No Grupo 1 (G1) pares de embriões (n= 67 pares) sem ZP foram cultivados em microgotas de 10 μL de meio; no Grupo 2 (G2) pares de embriões (n= 69 pares) sem ZP foram submetidos ao CIV pelo sistema WOW modificado, no qual os micropoços foram produzidos manualmente dentro de poços de placas de quatro poços contendo 500 μL de meio; finalmente dez embriões em média por replicação do grupo controle (GC), com a zona pelúcida intacta, foram cultivados em gotas de 100 μL de meio. Os resultados de seis replicações foram analisados aplicando-se o teste do χ 2, para P<0,05. Os dados revelaram diferença significativa entre os grupos 1 e 2 nas taxas de agregação de massas celulares: G1= 58% (39/67) e G2= 83% (57/69). As taxas de desenvolvimento embrionário até o estádio de blastocisto apresentaram diferenças significas entre os três grupos: G1= 43% (29/67), G2= 66% (46/69) e GC= 92% (55/60). O sistema de cultivo WOW modificado é mais eficiente para a produção in vitro de quimeras de embriões Mus musculos domesticus que o cultivo em microgotas.