Obtenção do gangliosídio GM3 de baço de cachorro

• Autor(a) principal: Nyland, Daniele Cristine
• Data de Publicação: 1993
• Outros Autores: Rosa, Maria Eliane Amador, Cheng, Chou Tsing, Gamallo, Juana Lia, Trindade, Vera Maria Treis
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/19220
• topic: Gangliosídeo G(M3); Ganglioside GM3

Gangliosídios são glicolipídios que possuem em sua estrutura obrigatoriamente um derivado de ácido siálico. Estes compostos existem em grande quantidade nas membranas plasmáticas das células, exercem papel importante nos processos de diferenciação celular e neurotransmissão. Duas enzimas chaves controlam a biossíntese dos diferentes gangliosídios: GD3 sintase e GM2 sintase. A primeira transfere um resíduo de ácido siálico ao GM3 a partir de CMP-NANA e a segunda transfere N-Ac-galactosamina ao GM3 a partir de UDP-N-Ac-Gal. Portanto para a medida das atividades destas enzimas é necessário, além dos nucleotídios doadores de açúcar, o gangliosídio GM3. Quantidades razoáveis deste composto são encontradas em baço de cachorro. Este órgão foi extraído, particionado conforme o método de Folch-Pi, e a fase superior passada através de uma coluna de DEAE-sephadex A-50 segundo Nores e Caputto (J. Neurochem., v.42, n.5, p.1205-1211, 1984). Os diferentes gangliosídios foram eluídos da seguinte forma: monogangliosídios com clorofórmio: metanol: formiato de amônio 0,08M (30:60:8); digangliosídios com clorofórmio:metanol:formiato de amônio 0,25M (30:60:8); trigangliosídios com clorofórmio:metanol:formiato de amônio 0,4M (30:60:8). Obteve-se uma maior recuperação no pico I da coluna, correspondente aos monogangliosídios. Uma CCD analítica desta tração em sílica gel-G-60 revelou a presença de 2 bandas majoritárias as quais migram como GM3 padrão. Provavelmente sejam duas isoformas de GM3 que se diferenciam na composição de ácido graxo. Para melhor purificação de GM3 fez-se a seguir CCD preparativa. Ao final do método de preparação conseguiu-se de aproximadamente 40g de baço, cerca de 1mg de GM3.