Estudo funcional da quitinase ChiMaA4 do fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae

• Autor(a) principal: Serrano, Thaiane Rispoli
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/264007
• topic: Metarhizium anisopliae; Quitinase

Metarhizium anisopliae é um fungo filamentoso que infecta uma ampla diversidade de hospedeiros artrópodes. A infecção ocorre pela penetração direta através da cutícula do hospedeiro que é composta por quitina. As quitinases são uma das famílias de hidrolases que estão envolvidas na dissolução do exoesqueleto quitinoso dos hospedeiros. Nos fungos estas enzimas estão envolvidas em morfogênese e nutrição. Análises de genomas mostram que entre 10 e 35 genes de quitinases estão presentes em fungos filamentosos. A análise in silico do genoma da linhagem E6 de M. anisopliae identificou 24 genes que provavelmente codificam para quitinases. As quitinases propostas foram categorizadas em quatro subgrupos de acordo com a sua proximidade filogenética e organização estrutural. Apesar do número de quitinases já isoladas ou descritas em fungos leveduriformes e filamentosos ser amplo, estudos envolvendo a descrição exata da função dessas quitinases ainda são escassos. Estudos anteriores do grupo mostraram que o gene que codifica ChiMaA4 apresenta níveis de transcritos similares em diferentes tipos celulares (conídio, hifa, apressório, blastosporo) e sob diferentes meios de cultivo: meio rico (MCc), GlcNAc (0,25%) ou quitina 1%. Nosso objetivo é a caracterização da função desta quitinase pela construção de mutantes funcionais para a quitinase ChiMaA4 e caracterização das alterações fenotípicas resultantes dessa deleção. Foi utilizada a metodologia de geração de mutantes mediada por Agrobacterium tumefaciens. A construção para a deleção da quitinase ChiMaA4 foi efetuada pela técnica de PCR de sobreposição (overlapping). O estudo realizado contribuirá para elucidar a função desta quitinase na fisiologia do M. anisopliae.