Aderência de bactérias do gênero Prevotella a componentes da matriz extracelular humana

• Autor(a) principal: Marre, Andressa Temperine de Oliveira
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRJ
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11422/20162
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA; Laminina; Prevotella; Matriz extracelular; Laminin; Extracellular matrix; Aderência bacteriana; Bacterial adhesion

Prevotella é uma bacteria Gram-negativa, anaeróbia, que está associada com infecções oportunistas na cavidade oral, vaginal e trato gastrointestinal. A adesão a tecidos do hospedeiro é considerada um passo fundamental para o início de um processo infeccioso e persistência. P. intermedia, P. melaninogenica e P. nigrescens requerem uma capacidade de adesão para iniciar a colonização na região sulco gingival e induzir um quadro de periodontite. Esse estudo teve como objetivo avaliar a interação entre Prevotella spp. e componentes da MEC, e também identificar os ligantes bacterianos responsáveis por essa adesão. Inicialmente, laminina foi imobilizada em lamínulas de vidro e desafiadas com diferentes concentrações de bactérias. Os resultados preliminares demonstraram a adesão de forma dose dependente de P. nigrescens e P. melaninogenica. O resultado mostra uma média de bactérias aderidas em 10 campos de 0,049 mm² escolhidos aleatoriamente e contados com o programa Image J. Para P. melaninogenica, de 599,5 Bac/CV na concentração de 5.107 CFU/mL, 141 Bac/CV na concentração de 107 CFU/mL e a adesão no controle negativo (BSA) foi de 38 Bac/CV na concentração de 108 CFU/mL. Em P. nigrescens, a média obtida foi de 316,6 Bac/CV na concentração de 5.107 CFU/mL, 155,4 Bac/CV na concentração de 107 CFU/mL, e a adesão ao controle negativo (BSA) foi de 98,1 Bac/CV na concentração de 108 CFU/mL. Testes com P. intermedia não demonstraram adesão a laminina. Para identificação dos ligantes, foi realizada uma extração de proteínas de membrana externa (PMEs) que foi visualizada por eletroforese e técnicas de coloração sensíveis. Essas proteinas foram submetidas a uma coluna de afinidade por cromatografia que consiste em laminina immobilizada em Sefarose NHS-ativada. As proteinas eluídas da coluna foram submetidas a análise por SDS-PAGE e coloração com nitrato de prata e azul de coomassie coloidal. As bandas e as amostras eluídas passaram por um processo de digestão com tripsina e enviadas para análise de espectometria de massas. Os resultados indicam que as espéceis de P. nigrescens e P. melaninogenica são capazes de se aderir a laminina, e P. nigrescens possui uma proteína com função de adesina. O estudo nos permitirá entender os mecanismos envolvidos no processo de adesão bacteriana a tecidos do hospedeiro e ajudar a estabelecer novas estratégias para prevenir essa colonização.