Participação das proteínas ezrina, radixina e moesina (ERM proteins) na invasão celular por amastigotas extracelulares de Trypanosoma cruzi

• Autor(a) principal: Ferreira, Éden Ramalho de Araujo [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=4233645; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47997
• topic: Trypanosoma cruzi; Amastigota extracelular; Erm proteins; Invasão celular; Citoesqueleto de actina; Trypanosoma cruzi; Extracellular amastigote; Erm proteins; Cell invasion; Actin cytoskeleton

Doença de Chagas é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi e afeta 6-7 milhões de pessoas em todo o mundo, principalmente nas Américas do Sul e Central. Entre os anos 2000 e 2011, a doença de Chagas foi responsável por 76% de todas as mortes causadas por doenças tropicais negligenciadas no Brasil. Em hospedeiros mamíferos T. cruzi alterna entre formas tripomastigotas (extracelular e infectivo) e amastigotas (intracelular e replicativo). Além disso, tripomastigotas podem se diferenciar em amastigotas no ambiente extracelular gerando amastigotas extracelulares (AEs) que são capazes de infectar células do hospedeiro. A invasão celular por estas formas é mediada por complexos eventos de sinalização celular que regulam os filamentos de actina, o principal componente do hospedeiro na invasão por AEs. Nesse contexto ERM proteins (ezrina, radixina e moesina) são proteínas chave que ligam os filamentos de actina à membrana plasmática e são importantes para migração celular, manutenção da morfologia e estrutura do tecido além de participar na invasão de patógenos intracelulares. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel das ERM proteins durante a invasão da célula hospedeira por AEs. Nossos resultados mostraram que a depleção de ezrina e de radixina, mas não de moesina, inibiu a invasão AEs em células HeLa. Além disso, análise por microscopia confocal de células HeLa trasnsfectadas com ERM proteins-GFP ou -HA revelou recrutamento e co-localização dessas proteínas com F-actina nos sítios de invasão dos AEs. Em ensaios utilizando células HeLa superexpressando ERM proteins observamos que a superexpressão de ezrina e de radixina, mas não de moesina, aumenta a invasão dos parasitas. Finalmente, por microscopia confocal time-lapse em células vivas foi observado retardo entre recrutamento de actina e invasão em células depletadas para ezrina ou radixina em comparação aos grupos de células depletadas para moesina ou sem transdução (controle). Em conjunto, esses resultados mostram papéis distintos das ERM proteins na dinâmica de actina e interação com a membrana plasmática durante a invasão de AEs na célula hospedeira.