Caracterização bioquímica das vesículas extracelulares isoladas das cepas Y e Yuyu do Trypanosoma Cruzi

• Autor(a) principal: Ribeiro, Kleber Silva [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=5006517; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/50662
• topic: T-Cruzi; Vesículas extracelulares; Espectrometria de massas; Proteínas; Fosfolipídeos; T-Cruzi; Extracellular vesicles; Mass spectrometry; Proteins; Phospholipids

Resumo Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da doença de Chagas e libera, a partir da membrana plasmática, vesículas extracelulares (EVs) expressando os principais glicoconjugados de superfície do parasita. EVs são partículas que contêm proteínas, lipídios e ácidos nucleicos, e que são liberadas, em condições fisiológicas e patológicas, por diferentes células e patógenos. No presente trabalho, purificamos, isolamos e comparamos EVs, das formas tripomastigotas de cepas de T.cruzi, que pertencem a diferentes unidades discretas de tipificação (DTU) e que possuem diferente grau de virulência. Inicialmente, por microscopia eletrônica de varredura (MEV), visualizamos a forma tripomastigota de T. cruzi liberando EVs a partir da membrana plasmática, e tripomastigotas da cepa YuYu (DTU Tc I) apresentaram mais partículas do que tripomastigotas da cepa Y (DTU Tc II). Depois, através da análise de nanopartículas (NTA), caracterizamos as EVs com relação ao tamanho e concentração. Não houve diferença significativa quando comparado o tamanho médio (150nm) de EVs de ambas as cepas, mas a concentração de partículas em amostras da cepa YuYu foi maior do que em amostras da cepa Y, confirmando a análise por MEV. A análise qualitativa por immunoblotting mostrou que EVs de ambas as cepas expressam transialidase (TS) e cruzipaína, mas a expressão é maior em EVs da cepa YuYu. Por LC-MS/MS, foram detectados em EVs de ambas as cepas, os principais glicoconjugados pertencentes às famílias multigênicas de T. cruzi, como as TS, Mucinas, proteínas de superfície associadas à mucina (MASP), proteínas de superfície GP63, entre outras, mas foi possível identificar mais diferentes proteínas em EVs da cepa YuYu do que em EVs da cepa Y. As análises de fosfolipídios (FL) por cromatografia de camada delgada (CCD), GC-MS e MALDI-TOF sugerem a presença, em EVs, de FL como fosfatidilcolina (FC), fosfatidiletanolamina (FE), fosfatidilinositol (FI) e fosfatidilserina (FS). A cepa YuYu, que é mais virulenta, libera mais EVs contendo mais proteínas e expressando mais das moléculas que têm em comum com EVs da cepa Y. Essa diferença pode ser importante na infectividade do parasita, uma vez que EVs têm função de comunicação intercelular à distância e por contato direto, e podem estar envolvidas em diferentes mecanismos, durante a interação parasitahospedeiro, como invasão celular, imunomodulação e evasão do sistema imune do hospedeiro.