Caracterização fenotípica e genotípica de isolados de Pseudomonas spp. do tomateiro tutorado no Brasil
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Data de Publicação: | 2020 |
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Resumo: | A incidência de bacterioses ocasionadas pelas bactérias do gênero Pseudomonas causam perdas consideráveis na produtividade no tomateiro. Esse gênero possui populações de isolados com grande diversidade genética, o que pode influenciar diretamente no nível de agressividade do patógeno. O objetivo deste trabalho foi caracterizar 43 isolados de Pseudomonas spp. obtidos de amostras de hastes ou folhas de tomateiro com sintomas de necrose da medula ou lesões foliares, respectivamente, quanto à aspectos fenotípicps e genotípicos. Os isolados bacterianos foram caracterizados morfológica e bioquimicamente pelos testes de Gram, crescimento anaeróbico, meio King B e testes LOPAT. A análise molecular foi realizada por rep-PCR (iniciadores REP, ERIC e BOX), iniciadores específicos e sequenciamento genético da região 16S de parte dos isolados. Para avaliar a agressividade, foram conduzidos dois experimentos, um com os isolados provenientes da haste e outro da folha do tomateiro. Em ambos os experimentos as plantas sadias de tomate cv. Santa Clara VF5600 foram inoculadas com suspensão bacteriana na concentração 1,0 x 108 UFC mL-1, sendo avaliada a severidade da doença com escala diagramática e calculada a Área Abaixo da Curva de Progresso da Doença. Quanto à morfologia, todas as colônias foram circulares e brilhantes, a maioria transparente e com bordas lisas. A elevação variou entre reta, levemente elevada e convexa, e a coloração em nuances de cor palha. Bioquimicamente, os isolados foram classificados nos grupos II, IVb, Va e Vb dos testes LOPAT, um isolado como P. corrugata e dois isolados bioquimicamente não determinados. Molecularmente, apresentaram grande diversidade genética por rep-PCR, não sendo possível relacionar as características moleculares com o local de origem. Com os iniciadores específicos apenas o isolado UFU B39 foi identificado como P. corrugata. No sequenciamento genético foi possível confirmar a identidade de vários isolados como sendo P. putida e P. fluorescens, bem como P. syringae pv. tomato, os quais apresentaram variação bioquímica. Nos testes de agressividade na haste os isolados UFU B39 e UFU H24 foram os mais agressivos, enquanto nos testes de folha não foi observada diferença na agressividade dos isolados. Dessa forma, conclui-se que os isolados apresentaram pouca variação morfológica, muita variação bioquímica e molecular e diferentes níveis de agressividade na haste. Este é o primeiro relato de P. putida e P. fluorescens causando doença no tomateiro tutorado no Brasil. |
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Os isolados bacterianos foram caracterizados morfológica e bioquimicamente pelos testes de Gram, crescimento anaeróbico, meio King B e testes LOPAT. A análise molecular foi realizada por rep-PCR (iniciadores REP, ERIC e BOX), iniciadores específicos e sequenciamento genético da região 16S de parte dos isolados. Para avaliar a agressividade, foram conduzidos dois experimentos, um com os isolados provenientes da haste e outro da folha do tomateiro. Em ambos os experimentos as plantas sadias de tomate cv. Santa Clara VF5600 foram inoculadas com suspensão bacteriana na concentração 1,0 x 108 UFC mL-1, sendo avaliada a severidade da doença com escala diagramática e calculada a Área Abaixo da Curva de Progresso da Doença. Quanto à morfologia, todas as colônias foram circulares e brilhantes, a maioria transparente e com bordas lisas. A elevação variou entre reta, levemente elevada e convexa, e a coloração em nuances de cor palha. Bioquimicamente, os isolados foram classificados nos grupos II, IVb, Va e Vb dos testes LOPAT, um isolado como P. corrugata e dois isolados bioquimicamente não determinados. Molecularmente, apresentaram grande diversidade genética por rep-PCR, não sendo possível relacionar as características moleculares com o local de origem. Com os iniciadores específicos apenas o isolado UFU B39 foi identificado como P. corrugata. No sequenciamento genético foi possível confirmar a identidade de vários isolados como sendo P. putida e P. fluorescens, bem como P. syringae pv. tomato, os quais apresentaram variação bioquímica. Nos testes de agressividade na haste os isolados UFU B39 e UFU H24 foram os mais agressivos, enquanto nos testes de folha não foi observada diferença na agressividade dos isolados. Dessa forma, conclui-se que os isolados apresentaram pouca variação morfológica, muita variação bioquímica e molecular e diferentes níveis de agressividade na haste. Este é o primeiro relato de P. putida e P. fluorescens causando doença no tomateiro tutorado no Brasil.The bacterial incidence caused by the bacteria genus Pseudomonas cause considerable losses in tomato yield. This genus has population the isolates with great genetic diversity, it can directly influence the pathogen aggressiveness level. The objective of this work was to characterize 43 isolates of Pseudomonas spp. obtained from samples of tomato stems or leaves with symptoms of pith necrosis or leaf lesions, respectively, regarding phenotypic and genotypic aspects. Bacterial isolates were morphological and biochemically characterized by Gram tests, anaerobic growth, King B medium and LOPAT tests. Molecular analysis was performed by rep-PCR (REP, ERIC and BOX primers), specific primers and genetic sequencing of the 16S region of from isolates part. To evaluate aggressiveness, two assays were conducted, one using the isolates from the stem and the another from the tomato leaf. In both experiments healthy tomato plants cv. Santa Clara VF5600 were inoculated with bacterial suspension at a concentration 1.0 x 108 CFU mL-1, and the severity of the disease was evaluated and the Area Under The Disease Progression Curve calculated. Morfologically, all colonies were circular and bright, most then of transparent and with smooth edges. The elevation varied between straight, slightly elevated and convex, and the coloration in shades of straw color. Biochemically, the isolates were classified into groups II, IVb, Va and Vb the LOPAT tests, one isolate as P. corrugata and two biochemically undetermined isolates. Molecularly the isolates shoued high genetic diversity by rep-PCR, and it was not possible to relate the molecular characteristics with the place of origin. With the specific primers only the UFU B39 isolate was identified as P. corrugata. Genetic sequencing confirmed the identified of several isolates such as P. putida and P. fluorescens, and also P. syringae pv. tomato that presented biochemical variation. In the aggressiveness tests in the stem, the isolates UFU B39 and UFU H24 were the most aggressive, and in the leaf test there was no difference in the isolates aggressiveness. It was concluded that the isolates showed low morfological variation, high biochemical and molecular variation and different levels of stem aggressiveness. This is the first report of P. putida and P. fluorescens causing disease in staked tomato plants in Brazil.FAU - Fundação de Apoio UniversitárioTese (Doutorado)2022-02-21porUniversidade Federal de UberlândiaPrograma de Pós-graduação em AgronomiaBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 United Stateshttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/us/info:eu-repo/semantics/openAccessCNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::AGRONOMIA::FITOSSANIDADE::FITOPATOLOGIASolanum lycopersicum L.Diversidade genéticaNecrose da medulaPinta bacterianaQueima das folhasCaracterização fenotípica e genotípica de isolados de Pseudomonas spp. do tomateiro tutorado no BrasilPhenotypic and genotypic characterization of Pseudomonas spp. isolates from staked tomato in Brazilinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisTebaldi, Nilvanira Donizetehttp://lattes.cnpq.br/0695770301548519Luz, José Magno Queirozhttp://lattes.cnpq.br/7022519480996266Lima, Alison Talis Martinshttp://lattes.cnpq.br/5848428341840005Pereira, Igor Souzahttp://lattes.cnpq.br/0610814748801550Duval, Alice Maria Quezadohttp://lattes.cnpq.br/3456750603463387http://lattes.cnpq.br/6525141893036748Mota, Lara Caroline Borges Moreira Mota14880978724-fd64-4d86-a98f-edfdbb353079reponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFUORIGINALCaracterizacaoFenotipicaeGenotipica.pdfCaracterizacaoFenotipicaeGenotipica.pdfTeseapplication/pdf8808655https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/28836/1/CaracterizacaoFenotipicaeGenotipica.pdf60fafde744f3ca9a5a02cfb0544e57b8MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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